| 摘要 | 第4-6页 |
| abstract | 第6-7页 |
| 1 引言 | 第10-20页 |
| 1.1 番木瓜环斑病毒 | 第10-12页 |
| 1.2 内涵体蛋白a蛋白酶(NIa-Pro)的研究 | 第12-13页 |
| 1.3 PRSV病毒侵染导致番木瓜ROS积累 | 第13-14页 |
| 1.4 蛋氨酸还原酶(Msr)参与抗ROS氧化防护的研究 | 第14-15页 |
| 1.5 PRSV NIa-Pro和PaMsrB1互作的研究 | 第15-16页 |
| 1.6 亲和层析技术 | 第16-18页 |
| 1.6.1 亲和层析技术原理 | 第16-17页 |
| 1.6.2 亲和层析的类型 | 第17-18页 |
| 1.7 纳升级液相色谱串联质谱联用技术(Nano LC-MS/MS) | 第18页 |
| 1.8 本研究的目的和意义 | 第18-19页 |
| 1.9 技术路线 | 第19-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-34页 |
| 2.1 材料 | 第20-24页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第20页 |
| 2.1.2 试剂 | 第20页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第20-21页 |
| 2.1.4 菌株及载体 | 第21页 |
| 2.1.5 培养基及主要试剂配方 | 第21-23页 |
| 2.1.6 引物 | 第23-24页 |
| 2.2 方法 | 第24-34页 |
| 2.2.1 NIa-pro、去信号肽PaMsrB1、GFP基因扩增 | 第24-25页 |
| 2.2.2 pMAL-c5x-NP、pMAL-c5x-B1、pMAL-c5x-GFP原核表达载体构建与转化 | 第25-27页 |
| 2.2.3 MBP-NIa、MBP-B1、MBP-GFP蛋白的诱导表达及纯化 | 第27页 |
| 2.2.4 NIa-Pro和PaMsrB1蛋白的纯化 | 第27-28页 |
| 2.2.5 Western Blot分析 | 第28页 |
| 2.2.6 NIa-Pro蛋白活性的检测 | 第28页 |
| 2.2.7 PaMsrB1蛋白活性的检测 | 第28-29页 |
| 2.2.8 PRSV-NIa-Pro与PaMsrB1间的氧化还原反应 | 第29-30页 |
| 2.2.9 PaMs1蛋白底物的分离与分析 | 第30-34页 |
| 3 结果与分析 | 第34-69页 |
| 3.1 原核表达PRSV-NIa-Pro蛋白及活性鉴定 | 第34-46页 |
| 3.1.1 PRSV-NIa-Pro基因扩增 | 第34-35页 |
| 3.1.2 pMAL-c5x-NP原核表达载体的构建与鉴定 | 第35-37页 |
| 3.1.3 MBP-NIa蛋白的表达和纯化 | 第37页 |
| 3.1.4 NIa-Pro蛋白的纯化 | 第37-38页 |
| 3.1.5 Western Blot鉴定NIa-Pro蛋白 | 第38-39页 |
| 3.1.6 PRSV-NIa-Pro蛋白活性鉴定 | 第39-46页 |
| 3.2 原核表达MBP-B1蛋白及活性鉴定 | 第46-52页 |
| 3.2.1 去信号肽PaMsrB1基因扩增 | 第46页 |
| 3.2.2 pMAL-c5x-B1原核表达载体的构建与鉴定 | 第46-48页 |
| 3.2.3 MBP-B1蛋白的表达和纯化 | 第48-49页 |
| 3.2.4 PaMsrB1蛋白的纯化 | 第49-50页 |
| 3.2.5 PaMsrB1蛋白活性鉴定 | 第50-52页 |
| 3.3 PRSV-NIa-Pro与PaMs-1间的氧化还原反应 | 第52-53页 |
| 3.4 PaMs-1蛋白底物的分离与分析 | 第53-69页 |
| 4 讨论 | 第69-76页 |
| 4.1 原核表达重组蛋白PRSV-NIa-Pro及活性分析 | 第69-71页 |
| 4.2 原核表达去信号肽的重组蛋白PaMsrB1及活性分析 | 第71-72页 |
| 4.3 重组蛋白PaMsrB1与PRSV-NIa-Pro的氧化还原反应 | 第72-75页 |
| 4.3.1 排除PaMsrB1序列中存在NIa-Pro酶切位点 | 第73页 |
| 4.3.2 PRSV-NIa-Pro蛋白中存在易被ROS氧化的Met | 第73-74页 |
| 4.3.3 重组蛋白PaMsrB1与PRSV-NIa-Pro的体外氧化还原反应 | 第74-75页 |
| 4.4 PaMsrB1蛋白底物的分离与分析 | 第75-76页 |
| 5 结论 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-83页 |
| 附录 | 第83-86页 |
| 致谢 | 第86页 |
