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钙/钙调蛋白依赖的丝氨酸激酶参与糖尿病大鼠外周神经病理性疼痛的分子机制研究

中文摘要第4-6页
Abstract第6-7页
第一章 引言第11-12页
第二章 材料与方法第12-25页
    2.1 实验对象第12页
    2.2 糖尿病(Diabetics Mellitus,DM)大鼠模型的建立第12页
        2.2.1 实验用药第12页
        2.2.2 造模方法第12页
    2.3 机械痛阈检测第12-13页
        2.3.1 实验仪器第12页
        2.3.2 实验用药第12页
        2.3.3 测试方法第12-13页
    2.4 热痛阈检测第13页
        2.4.1 实验仪器第13页
        2.4.2 实验用药第13页
        2.4.3 测试方法第13页
    2.5 运动功能测试(Rotarod test)第13-14页
        2.5.1 实验仪器第13页
        2.5.2 实验内容第13-14页
    2.6 组织特异性DRG神经元的标记、急性分离与培养第14-15页
        2.6.1 实验仪器第14页
        2.6.2 实验试剂第14页
        2.6.3 荧光染料DiI标记足底相关DRG神经元第14页
        2.6.4 DRG神经元的急性分离第14-15页
    2.7 全细胞膜片钳实验第15-18页
        2.7.1 实验仪器第15页
        2.7.2 实验试剂及药品第15-16页
        2.7.3 拉制玻璃微电极第16页
        2.7.4 全细胞膜片钳记录第16-17页
        2.7.5 神经元兴奋性记录第17-18页
        2.7.6 数据分析第18页
    2.8 细胞培养第18-19页
        2.8.1 实验试剂第18页
        2.8.2 实验仪器第18页
        2.8.3 DMEM培养基的配置第18-19页
        2.8.4 细胞系/株的培养第19页
        2.8.5 慢病毒包装及细胞转染第19页
        2.8.6 细胞成像第19页
    2.9 Western Blotting检测蛋白表达第19-21页
        2.9.1 实验试剂第19-20页
        2.9.2 实验仪器第20页
        2.9.3 实验方法第20-21页
    2.10 qRT-PCR检测目的基因mRNA含量第21-23页
        2.10.1 总RNA的提取第21页
        2.10.2 cDNA的合成第21-22页
        2.10.3 实时定量PCR第22-23页
        2.10.4 实时定量PCR数据分析第23页
    2.11 免疫细胞化学第23-24页
        2.11.1 实验试剂第23页
        2.11.2 实验仪器第23页
        2.11.3 实验方法第23-24页
    2.12 免疫共沉淀第24-25页
        2.12.1 实验试剂第24页
        2.12.2 实验仪器第24页
        2.12.3 实验方法第24页
        2.12.4 注意事项第24-25页
第三章 实验结果第25-37页
    3.1 CASK/嘌呤能受体信号转导途径参与DM大鼠的足底痛觉过敏的形成第25-37页
        3.1.1 腹腔注射STZ诱导成年大鼠痛觉行为学评分显著降低第25-26页
        3.1.2 CASK基因在DM组大鼠DRG中转录、表达水平显著增强第26-27页
        3.1.3 P2X2基因在DM组大鼠DRG中表达水平显著增强第27-29页
        3.1.4 CASK shRNA和CASK scrRNA的感染效率无明显差异第29页
        3.1.5 CASK shRNA显著降低DM大鼠足底特异性DRG神经元ATP电流密度第29-30页
        3.1.6 CASK shRNA显著反转P2X2基因在DM组大鼠DRG中表达水平第30-33页
        3.1.7 CASK 和嘌呤能受体之间的相互作用第33-35页
        3.1.8 CASK shRNA显著升高了DM大鼠的痛觉行为学评分第35-37页
第四章 讨论第37-40页
    4.1 CASK的辅转录因子作用第37-38页
    4.2 CASK的蛋白激酶功能第38页
    4.3 CASK的支架蛋白功能第38-40页
第五章 结论第40-41页
参考文献第41-45页
Review第45-56页
    References第50-56页
致谢第56-58页

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