| 摘要 | 第4-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 第1章 引言 | 第10-14页 |
| 1.1 七鳃鳗免疫基因 | 第10页 |
| 1.2 适应性免疫系统的进化 | 第10-11页 |
| 1.3 七鳃鳗类淋巴细胞 | 第11页 |
| 1.4 七鳃鳗基因VLRB | 第11-13页 |
| 1.4.1 VLRB对抗原的识别 | 第11-12页 |
| 1.4.2 七鳃鳗VLRB研究现状 | 第12-13页 |
| 1.5 凝集素 | 第13页 |
| 1.6 研究七鳃鳗中VLRB的重要意义 | 第13-14页 |
| 第2章 VLRB原核重组蛋白的构建表达纯化及多抗制备 | 第14-27页 |
| 2.1 材料 | 第14-15页 |
| 2.1.1 动物材料 | 第14页 |
| 2.1.2 菌株、质粒载体 | 第14页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第14页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第14-15页 |
| 2.2 方法 | 第15-20页 |
| 2.2.1 目的基因的PCR扩增 | 第15页 |
| 2.2.2 原核表达质粒的构建 | 第15-17页 |
| 2.2.3 目的基因的原核表达与鉴定 | 第17页 |
| 2.2.4 目的蛋白的提取与纯化 | 第17-18页 |
| 2.2.5 动物免疫 | 第18页 |
| 2.2.6 多克隆抗体纯化 | 第18-19页 |
| 2.2.7 纯化后抗体的效价检测 | 第19页 |
| 2.2.8 纯化后抗体的特异性检测 | 第19-20页 |
| 2.3 结果 | 第20-25页 |
| 2.3.1 VLRB生物信息学分析 | 第20-21页 |
| 2.3.2 VLRB基因克隆及其表达载体的构建与鉴定 | 第21-22页 |
| 2.3.3 重组VLRB的原核表达可溶鉴定及纯化 | 第22-23页 |
| 2.3.4 动物免疫及VLRB多克隆抗体的效价检测 | 第23-25页 |
| 2.3.5 兔抗VLRB多克隆抗体特异性检测 | 第25页 |
| 2.4 讨论 | 第25-27页 |
| 第3章 VLRB真核表达载体的构建表达及纯化 | 第27-37页 |
| 3.1 材料 | 第27页 |
| 3.1.1 菌种、质粒和细胞株 | 第27页 |
| 3.1.2 工具酶和主要试剂 | 第27页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第27页 |
| 3.2 方法 | 第27-31页 |
| 3.2.1 引物设计与目的基因PCR扩增 | 第27页 |
| 3.2.2 真核表达载体的制备 | 第27-28页 |
| 3.2.3 重组VLRB真核表达载体构建 | 第28页 |
| 3.2.4 细胞培养 | 第28页 |
| 3.2.5 细胞转染 | 第28-29页 |
| 3.2.6 VLRB真核重组蛋白在 293T细胞中的表达与定位检测(免疫荧光) | 第29页 |
| 3.2.7 WB方法确定VLRB的表达位置 | 第29页 |
| 3.2.8 VLRB真核重组蛋白的表达与纯化 | 第29-30页 |
| 3.2.9 VLRB真核重组蛋白的鉴定 | 第30-31页 |
| 3.3 结果 | 第31-35页 |
| 3.3.1 PCR获得目的片段 | 第31页 |
| 3.3.2 VLRB真核表达载体的构建 | 第31-32页 |
| 3.3.3 转染后VLRB蛋白表达鉴定 | 第32-33页 |
| 3.3.4 VLRB表达位置的鉴定 | 第33-34页 |
| 3.3.5 VLRB真核重组蛋白的表达纯化 | 第34-35页 |
| 3.3.6 纯化后的VLRB真核重组蛋白的鉴定 | 第35页 |
| 3.4 讨论 | 第35-37页 |
| 第4章 VLRB功能初步研究 | 第37-57页 |
| 4.1 材料 | 第37页 |
| 4.1.1 动物材料和菌株 | 第37页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第37页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第37页 |
| 4.2 方法 | 第37-44页 |
| 4.2.1 Western blot分析各组织中VLRB蛋白的表达 | 第37页 |
| 4.2.2 免疫组化分析各组织中VLRB蛋白的表达情况 | 第37-38页 |
| 4.2.3 免疫荧光分析各组织细胞中VLRB蛋白的表达与定位 | 第38页 |
| 4.2.4 Real-time PCR法检测LPS免疫前后VLRB变化 | 第38-40页 |
| 4.2.5 VLRB真核重组蛋白对MCF-7 细胞的活性鉴定 | 第40-41页 |
| 4.2.6 VLRB抑菌实验 | 第41页 |
| 4.2.7 C3、C1q与VLRB相互作用实验 | 第41页 |
| 4.2.8 Far Western blot方法检测intelectin与VLRB相互作用 | 第41-42页 |
| 4.2.9 VLRB凝集实验 | 第42-44页 |
| 4.3 结果 | 第44-54页 |
| 4.3.1 七鳃鳗各个组织中VLRB蛋白的鉴定（Western blot） | 第44-45页 |
| 4.3.2 七鳃鳗各个组织中VLRB蛋白组织水平的鉴定（免疫组化） | 第45-46页 |
| 4.3.3 七鳃鳗各个组织细胞中VLRB蛋白表达与定位的鉴定(免疫荧光) | 第46-47页 |
| 4.3.4 Real-time PCR法检测LPS免疫前后VLRB表达情况 | 第47页 |
| 4.3.5 VLRB对MCF-7 细胞活性鉴定 | 第47-48页 |
| 4.3.6 VLRB抑菌情况的鉴定 | 第48-49页 |
| 4.3.7 C3、C1q与VLRB相互作用的鉴定 | 第49-50页 |
| 4.3.8 VLRB与Intelectin相互作用的鉴定 | 第50页 |
| 4.3.9 凝集素的制备 | 第50-51页 |
| 4.3.10 VLRB凝集大肠杆菌和兔红细胞实验（显微镜拍摄） | 第51-53页 |
| 4.3.11 VLRB凝集实验(扫描电镜拍摄) | 第53-54页 |
| 4.4 讨论 | 第54-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-62页 |
| 攻读硕士学位期间发表学术论文情况 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
