| 中文摘要 | 第7-9页 |
| 英文摘要 | 第9-11页 |
| 前言 | 第12-14页 |
| 材料与方法 | 第14-28页 |
| 1. 实验材料 | 第14-18页 |
| 1.1 细胞株及合成样本DNA | 第14页 |
| 1.2 主要仪器 | 第14-15页 |
| 1.3 主要试剂 | 第15-16页 |
| 1.4 主要溶液配置 | 第16-17页 |
| 1.5 引物探针设计合成 | 第17-18页 |
| 2. 实验方法 | 第18-28页 |
| 2.1 细胞培养及收集 | 第18-19页 |
| 2.2 基因组DNA的提取 | 第19-20页 |
| 2.3 超声裂解基因组DNA | 第20页 |
| 2.4 PCR扩增及产物纯化、测序 | 第20-22页 |
| 2.5 qPCR体系的建立 | 第22-25页 |
| 2.6 ddPCR体系的建立 | 第25-27页 |
| 2.7 双探针法ddPCR与联合使用TaqMan探针和染料法ddPCR的比较 | 第27-28页 |
| 结果 | 第28-39页 |
| 1.基因组DNA超声断裂效果 | 第28页 |
| 2.PCR扩增及产物纯化、测序 | 第28-30页 |
| 3.qPCR | 第30-34页 |
| 3.1 最适退火温度及溶解曲线分析 | 第30-31页 |
| 3.2 扩增效率分析 | 第31-32页 |
| 3.3 探针特异性分析 | 第32页 |
| 3.4 比较相同拷贝数的三种样本在相同单探针和染料实时定量PCR体系下荧光信号的差异 | 第32-34页 |
| 4. ddPCR | 第34-39页 |
| 4.1 基于双探针法ddPCR检测PIK3CA基因E545K位点的三种基因型 | 第34-35页 |
| 4.2 联合使用TaqMan探针和染料法ddPCR检测PIK3CA基因E545K位点的三种基因型 | 第35-37页 |
| 4.3 双探针法ddPCR与联合使用TaqMan探针和染料法ddPCR的比较 | 第37-39页 |
| 讨论 | 第39-43页 |
| 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-47页 |
| 综述 | 第47-60页 |
| 参考文献 | 第55-60页 |
| 致谢 | 第60-61页 |
