| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 英文缩略语表 | 第11-13页 |
| 第一章 前言 | 第13-40页 |
| 1.1 狂犬病的危害和流行 | 第13-14页 |
| 1.2 RABV的分子生物学特征 | 第14-20页 |
| 1.2.1 RABV理化特性 | 第14-15页 |
| 1.2.2 RABV基因组结构特征 | 第15-16页 |
| 1.2.3 RABV的结构蛋白 | 第16-20页 |
| 1.3 RABV的复制 | 第20-23页 |
| 1.3.1 RABV的吸附和胞吞 | 第20-21页 |
| 1.3.2 RABV基因组的转录和复制 | 第21-23页 |
| 1.3.3 RABV的装配和出芽 | 第23页 |
| 1.4 狂犬病的防制及疫苗研发 | 第23-26页 |
| 1.4.1 狂犬病的治疗和预防 | 第23-24页 |
| 1.4.2 狂犬病疫苗的研发 | 第24-26页 |
| 1.5 mRNA5’端帽子结构及其作用 | 第26-29页 |
| 1.5.1 mRNA 5’端帽子结构的存在能使pre-mRNA获得有效剪切 | 第27页 |
| 1.5.2 mRNA 5’端帽子结构能防止RNA从 5’端降解 | 第27-28页 |
| 1.5.3 mRNA 5’端帽子结构利于起始蛋白翻译 | 第28页 |
| 1.5.4 病毒RNA 5’端帽子结构可以逃避宿主先天性免疫系统的围捕 | 第28-29页 |
| 1.6 宿主mRNA 5’端加帽的机制 | 第29-30页 |
| 1.7 病毒mRNA 5’端加帽的机制 | 第30-36页 |
| 1.7.1 经典加帽方式 | 第31页 |
| 1.7.2 非经典加帽方式 | 第31-36页 |
| 1.8 病毒mRNA 5’端加帽与逃避宿主先天性免疫之间的关系 | 第36-40页 |
| 第二章 研究目的和意义 | 第40-41页 |
| 第三章 材料和方法 | 第41-56页 |
| 3.1 实验材料 | 第41-42页 |
| 3.1.1 细胞 | 第41页 |
| 3.1.2 质粒和病毒 | 第41页 |
| 3.1.3 试剂和抗体 | 第41-42页 |
| 3.1.4 实验动物 | 第42页 |
| 3.1.5 实验仪器 | 第42页 |
| 3.2 方法 | 第42-56页 |
| 3.2.1 rRABV MTase潜在关键位点的预测 | 第42页 |
| 3.2.2 MTase潜在关键位点突变的rRABV全长克隆构建 | 第42-44页 |
| 3.2.3 rRABV的拯救 | 第44-45页 |
| 3.2.4 rRABV的传代 | 第45-46页 |
| 3.2.5 rRABV遗传稳定性的检测 | 第46页 |
| 3.2.6 rRABV的生长动力学 | 第46页 |
| 3.2.7 rRABV在BSR细胞中的荧光灶大小测定 | 第46-47页 |
| 3.2.8 Western blot | 第47页 |
| 3.2.9 实时荧光定量RT-PCR | 第47页 |
| 3.2.10免疫组织化学检测 | 第47-48页 |
| 3.2.11 IFN预处理实验 | 第48页 |
| 3.2.12 I型IFN的生物学检测实验 | 第48-49页 |
| 3.2.13 流式细胞术 | 第49页 |
| 3.2.14 RABV VNA的检测 | 第49-50页 |
| 3.2.15 rB2c对小鼠的致病力实验 | 第50-52页 |
| 3.2.16 K1685和K1829突变的rRABVs对小鼠的致病力实验 | 第52-55页 |
| 3.2.17 突变病毒rB2c-K1685A和rB2c-K1829A与亲本病毒rB2c的免疫原性比较 | 第55页 |
| 3.2.18 狂犬病发病小鼠临床症状评分标准 | 第55页 |
| 3.2.19 数据分析 | 第55-56页 |
| 第四章 结果和分析 | 第56-87页 |
| 4.1 RABVL基因中保守的K-D-K-E四聚体区域的确定以及MTase缺陷的突变体的构建 | 第56-59页 |
| 4.2 K-D-K-E结构域中的Asp-1797和Glu-1867影响重组病毒的遗传稳定性 | 第59-63页 |
| 4.3 rB2c-K1685A和rB2c-K1829A的体外表型特征 | 第63-66页 |
| 4.4 rB2c-K1685A和rB2c-K1829A未增加I型IFN的产生 | 第66-68页 |
| 4.5 rB2c-K1685A和rB2c-K1829A比rB2c对IFN预处理反应更敏感 | 第68-69页 |
| 4.6 IFIT2可以在体外限制rB2c-K1685A和rB2c-K1829A的复制 | 第69-73页 |
| 4.7 rB2c-K1685A和rB2c-K1829A在体内的致病力减弱 | 第73-85页 |
| 4.7.1 rB2c-K1685A和rB2c-K1829A不能通过后肢肌肉注射的方式使小鼠产生狂犬病症状 | 第76-79页 |
| 4.7.2 rB2c-K1685A和rB2c-K1829A不能通过脑内注射的方式使小鼠产生狂犬病症状 | 第79-85页 |
| 4.8 rB2c-K1685A和rB2c-K1829A的免疫原性与rB2c相当 | 第85-87页 |
| 第五章 讨论 | 第87-92页 |
| 5.1 关于MTase活性鉴定的方法和可行性 | 第87-88页 |
| 5.2 K-D-K-E催化四聚体区域承担MTase活性 | 第88页 |
| 5.3 IFITs对MTase功能缺失病毒的作用机制分析 | 第88-90页 |
| 5.4 制备MTase缺失的弱毒疫苗株的可行性 | 第90-92页 |
| 5.4.1 MTase缺陷病毒的遗传稳定性 | 第90页 |
| 5.4.2 MTase缺陷病毒的免疫原性 | 第90-91页 |
| 5.4.3 MTase缺陷病毒的作为疫苗株的改进 | 第91-92页 |
| 结论 | 第92-93页 |
| 参考文献 | 第93-105页 |
| 附录 | 第105-107页 |
| 致谢 | 第107-108页 |
