| 摘要 | 第5-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 绪论 | 第14-32页 |
| 1 桡足类在海洋生态系统中的重要地位及其对环境变化的响应 | 第14-16页 |
| 1.1 海洋桡足类及其生态地位 | 第14-15页 |
| 1.2 桡足类对海洋环境变化的响应 | 第15-16页 |
| 2 分子生物学技术在海洋桡足类研究中的应用 | 第16-23页 |
| 2.1 桡足类种类鉴定及DNA条形码研究 | 第16-17页 |
| 2.2 桡足类种群遗传研究 | 第17-18页 |
| 2.3 桡足类分子系统发育研究 | 第18-19页 |
| 2.4 桡足类在基因水平上对环境胁迫的响应研究 | 第19-23页 |
| 3 目的基因筛选方法 | 第23-25页 |
| 4 PAHs污染及其对浮游动物的毒性效应 | 第25-30页 |
| 4.1 国内外PAHs的污染现状 | 第25-26页 |
| 4.2 PAHs对海洋浮游动物的毒性效应 | 第26-30页 |
| 5 本研究的立论依据、研究内容、目的和意义 | 第30-32页 |
| 第二章 桡足类全长cDNA文库构建新方法的建立 | 第32-81页 |
| 第一节 太平洋纺锤水蚤(Acartia pacifica)全长cDNA文库的构建及5’-CS序列的获取 | 第32-47页 |
| 1 材料和方法 | 第33-40页 |
| 1.1 样品采集与鉴定挑选 | 第33页 |
| 1.2 太平洋纺锤水蚤RNA样品固定及总RNA的提取 | 第33-34页 |
| 1.3 太平洋纺锤水蚤mRNA的分离纯化 | 第34-35页 |
| 1.4 太平洋纺锤水蚤全长cDNA文库的构建 | 第35-39页 |
| 1.5 cDNA文库的库容测定 | 第39页 |
| 1.6 细菌质粒提取及酶切、测序 | 第39-40页 |
| 1.7 基因序列的生物信息学分析 | 第40页 |
| 2 结果 | 第40-45页 |
| 2.1 太平洋纺锤水蚤总RNA及mRNA的浓度检测 | 第40页 |
| 2.2 胶回收目的片段的浓度、纯度检测 | 第40-41页 |
| 2.3 太平洋纺锤水蚤cDNA文库库容分析 | 第41页 |
| 2.4 质粒提取的酶切结果 | 第41-42页 |
| 2.5 太平洋纺锤水蚤文库序列分析 | 第42页 |
| 2.6 太平洋纺锤水蚤cDNA文库生物信息学分析 | 第42-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 4 小结 | 第46-47页 |
| 第二节 应用5’-CS的海洋常见桡足类全长cDNA文库构建 | 第47-65页 |
| 1 材料和方法 | 第47-51页 |
| 1.1 样品采集与鉴定挑选 | 第47-48页 |
| 1.2 引物设计 | 第48页 |
| 1.3 桡足类RNA样品固定及总RNA提取 | 第48页 |
| 1.4 桡足类5’-CS全长cDNA文库的构建 | 第48-50页 |
| 1.5 细菌质粒的提取、酶切及测序 | 第50页 |
| 1.6 桡足类文库基因序列的生物信息学分析 | 第50-51页 |
| 2 结果 | 第51-62页 |
| 2.1 总RNA的浓度、纯度检测 | 第51-52页 |
| 2.2 cDNA PCR扩增产物电泳检测 | 第52页 |
| 2.3 PCR产物胶回收后DNA浓度、纯度及电泳检测 | 第52-53页 |
| 2.4 细菌质粒的提取、酶切检测及测序 | 第53-54页 |
| 2.5 稀释度曲线 | 第54-55页 |
| 2.6 太平洋纺锤水蚤和火腿伪镖水蚤5’-CS文库中cDNA结构特征 | 第55-57页 |
| 2.7 桡足类5’-CS文库序列比对结果及基因注释 | 第57-62页 |
| 3 讨论 | 第62-63页 |
| 4 小结 | 第63-65页 |
| 第三节 桡足类细胞质核糖体蛋白基因 | 第65-81页 |
| 1 材料和方法 | 第65-69页 |
| 1.1 材料 | 第65-66页 |
| 1.2 引物设计 | 第66-67页 |
| 1.3 9种火腿伪镖水蚤核糖体蛋白基因的克隆 | 第67-68页 |
| 1.4 核糖体蛋白cDNA序列生物信息学分析 | 第68-69页 |
| 2 结果与讨论 | 第69-80页 |
| 2.1 桡足类核糖体蛋白基因的鉴定 | 第69-73页 |
| 2.2 太平洋纺锤水蚤和火腿伪镖水蚤核糖体蛋白cDNA序列特征 | 第73-74页 |
| 2.3 太平洋纺锤水蚤和火腿伪镖水蚤核糖体蛋白推导氨基酸序列分析 | 第74-76页 |
| 2.4 太平洋纺锤水蚤和火腿伪镖水蚤核糖体蛋白同义密码子分析 | 第76-80页 |
| 3 小结 | 第80-81页 |
| 第三章 PAHs胁迫下火腿伪镖水蚤消减文库的构建 | 第81-103页 |
| 第一节 PAHs(1,2-二甲基萘、芘)对火腿伪镖水蚤的急性毒性 | 第81-86页 |
| 1 材料和方法 | 第82-84页 |
| 1.1 实验材料及饵料藻的培养 | 第82页 |
| 1.2 1,2-二甲基萘、芘储备液配制 | 第82页 |
| 1.3 1,2-二甲基萘、芘对火腿伪镖水蚤急性毒性测定 | 第82-84页 |
| 2 结果 | 第84-85页 |
| 2.1 1,2-二甲基萘对火腿伪镖水蚤的急性毒性 | 第84页 |
| 2.2 芘对火腿伪镖水蚤的急性毒性 | 第84-85页 |
| 3 讨论 | 第85页 |
| 4 小结 | 第85-86页 |
| 第二节 PAHs亚致死浓度暴露下火腿伪镖水蚤的消减文库构建 | 第86-103页 |
| 1 材料和方法 | 第86-91页 |
| 1.1 实验材料及饵料藻培养 | 第86页 |
| 1.2 1,2-二甲基萘、芘亚致死浓度暴露实验 | 第86-87页 |
| 1.3 PAHs胁迫下的火腿伪镖水蚤消减杂交文库构建 | 第87-90页 |
| 1.4 抑制性消减文库生物信息学分析 | 第90-91页 |
| 2 结果 | 第91-101页 |
| 2.1 火腿伪镖水蚤总RNA质量及浓度检测 | 第91页 |
| 2.2 PCR扩增及浓度调整后的凝胶电泳检测 | 第91-92页 |
| 2.3 消减杂交后浓度及电泳检测 | 第92-93页 |
| 2.4 细菌质粒的提取、酶切检测及测序 | 第93-94页 |
| 2.5 1,2-二甲基萘和芘胁迫下消减文库序列比对及基因注释 | 第94-101页 |
| 3 讨论 | 第101-102页 |
| 4 小结 | 第102-103页 |
| 第四章 火腿伪镖水蚤重要功能基因在PAHs胁迫下的表达模式分析 | 第103-118页 |
| 1 材料与方法 | 第103-106页 |
| 1.1 实验材料及饵料藻培养 | 第103页 |
| 1.2 1,2-二甲基萘和芘胁迫下的亚致死浓度暴露实验 | 第103页 |
| 1.3 不同暴露条件下样品总RNA的提取 | 第103页 |
| 1.4 火腿伪镖水蚤样品MdT-cDNA第一链的合成 | 第103-104页 |
| 1.5 定量引物设计 | 第104-105页 |
| 1.6 标准品制备及拷贝数计算 | 第105页 |
| 1.7 RT-qPCR检测 | 第105页 |
| 1.8 数据处理 | 第105-106页 |
| 2 实验结果 | 第106-114页 |
| 2.1 不同样品总RNA浓度检测 | 第106页 |
| 2.2 定量引物验证及标准曲线 | 第106-108页 |
| 2.3 参考基因选择 | 第108-109页 |
| 2.4 火腿伪镖水蚤目的基因表达差异分析 | 第109-114页 |
| 3 讨论 | 第114-117页 |
| 4 小结 | 第117-118页 |
| 第五章 总结与展望 | 第118-121页 |
| 1 主要结果 | 第118-119页 |
| 2 论文创新点 | 第119-120页 |
| 3 研究展望 | 第120-121页 |
| 参考文献 | 第121-137页 |
| 致谢 | 第137-139页 |
| 个人简历 | 第139-140页 |
| 参加的主要科研项目 | 第140页 |
| 学术成果 | 第140页 |
