| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11-12页 |
| 1 文献综述 | 第13-23页 |
| 1.1 PDCoV概述 | 第13-22页 |
| 1.1.1 病原学 | 第14页 |
| 1.1.2 基因组结构 | 第14-16页 |
| 1.1.3 结构蛋白及功能 | 第16-17页 |
| 1.1.4 PDCoV的流行病学 | 第17页 |
| 1.1.5 冠状病毒跨种属传播的机制 | 第17-19页 |
| 1.1.6 PDCoV的病毒分离及体外培养特性 | 第19页 |
| 1.1.7 PDCoV的致病性及临床症状 | 第19页 |
| 1.1.8 PDCoV的诊断与检测技术 | 第19-21页 |
| 1.1.9 疾病的防治 | 第21-22页 |
| 1.2 研究目的与意义 | 第22-23页 |
| 2 猪δ冠状病毒重组N蛋白的制备与抗原性检测 | 第23-31页 |
| 2.1 材料 | 第23页 |
| 2.1.1 主要试剂、毒株及菌种 | 第23页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第23页 |
| 2.2 方法 | 第23-27页 |
| 2.2.1 RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.2 采用RT-PCR方法将目的基因片段扩增 | 第24页 |
| 2.2.3 PCR产物的胶回收 | 第24页 |
| 2.2.4 PCR产物与原核表达载体的双酶切 | 第24页 |
| 2.2.5 产物的连接及转化 | 第24-25页 |
| 2.2.6 鉴定重组质粒并表达蛋白 | 第25-26页 |
| 2.2.7 PDCoVN蛋白的纯化 | 第26页 |
| 2.2.8 PDCoV重组N蛋白的抗原性分析 | 第26-27页 |
| 2.3 结果 | 第27-29页 |
| 2.3.1 PDCoVN基因的扩增 | 第27页 |
| 2.3.2 重组质粒的酶切鉴定结果 | 第27-28页 |
| 2.3.3 表达重组蛋白并纯化、鉴定 | 第28-29页 |
| 2.3.4 重组N蛋白的Westernblot分析 | 第29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-31页 |
| 3 猪δ冠状病毒N蛋白单克隆抗体制备及鉴定 | 第31-45页 |
| 3.1 材料 | 第31页 |
| 3.1.1 主要试剂、细胞及实验动物 | 第31页 |
| 3.1.2 主要实验仪器及设备 | 第31页 |
| 3.2 方法 | 第31-38页 |
| 3.2.1 单克隆抗体的制备 | 第31-37页 |
| 3.2.2 单克隆抗体的鉴定 | 第37-38页 |
| 3.3 结果 | 第38-43页 |
| 3.3.1 间接ELISA检测方法的建立 | 第38-39页 |
| 3.3.2 杂交瘤细胞株的建立 | 第39-40页 |
| 3.3.3 单克隆抗体的效价测定 | 第40页 |
| 3.3.4 抗体亚类的鉴定 | 第40页 |
| 3.3.5 单抗免疫活性及特异性鉴定结果 | 第40-42页 |
| 3.3.6 IFA试验结果 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-45页 |
| 4 猪δ冠状病毒N蛋白抗原表位的鉴定 | 第45-53页 |
| 4.1 材料 | 第45-46页 |
| 4.1.1 主要试剂、毒株及菌种 | 第45-46页 |
| 4.1.2 主要实验仪器及设备 | 第46页 |
| 4.2 方法 | 第46-48页 |
| 4.2.1 N蛋白抗原表位的初步鉴定 | 第46-48页 |
| 4.3 结果 | 第48-50页 |
| 4.3.1 N蛋白分段扩增、克隆与表达 | 第48-49页 |
| 4.3.2 1E10株针对抗原表位的初步鉴定 | 第49-50页 |
| 4.4 讨论 | 第50-53页 |
| 5 结论 | 第53-55页 |
| 参考文献 | 第55-63页 |
| 致谢 | 第63-65页 |
| 个人简历 | 第65页 |