| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-15页 |
| 第一章 引言 | 第15-27页 |
| ·EI 研究进展 | 第15-22页 |
| ·21 世纪的 EI 疫情 | 第15页 |
| ·EIV 的演变 | 第15-17页 |
| ·EIV 的跨种传播 | 第17-18页 |
| ·我国 EI 的流行情况 | 第18页 |
| ·EI 疫苗研究进展 | 第18-22页 |
| ·反向遗传学在流感疫苗研究中的应用 | 第22-23页 |
| ·流感重组腺病毒疫苗研究进展 | 第23-25页 |
| ·流感病毒样颗粒疫苗研究进展 | 第25页 |
| ·本研究的目的和意义 | 第25-27页 |
| 第二章 2010-2011 年中国 EIV HA 基因遗传演化分析 | 第27-38页 |
| 摘要 | 第27-28页 |
| ·材料与方法 | 第28-31页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第28页 |
| ·毒株 | 第28-29页 |
| ·病毒基因克隆鉴定 | 第29-31页 |
| ·HA 基因的拼接和序列分析 | 第31页 |
| ·结果 | 第31-36页 |
| ·EIV 分离株 HA 基因的同源性分析 | 第31-36页 |
| ·HA 基因遗传演化分析 | 第36页 |
| ·EIV HA 基因的抗原位点变异 | 第36页 |
| ·讨论 | 第36-38页 |
| 第三章 利用反向遗传学技术构建 H3N8 亚型 EI 疫苗 | 第38-54页 |
| 摘要 | 第38页 |
| ·材料与方法 | 第38-46页 |
| ·毒株 | 第38-39页 |
| ·反向遗传学操作系统 | 第39页 |
| ·细胞和菌株 | 第39页 |
| ·鸡胚和实验动物 | 第39页 |
| ·试剂和仪器 | 第39-40页 |
| ·XJ3 RNA 提取以及 HA 和 NA 的 PCR 扩增 | 第40页 |
| ·XJ3 HA 和 NA 重组双向转录/翻译质粒的构建 | 第40-41页 |
| ·含 XJ3 HA 和 NA 基因重组 EI 疫苗株的拯救和鉴定 | 第41-44页 |
| ·rH3N8-PR 疫苗在小鼠模型上的免疫学研究 | 第44-45页 |
| ·rH3N8-PR 疫苗在豚鼠模型上的免疫学研究 | 第45页 |
| ·rH3N8-PR 疫苗对马的免疫保护研究 | 第45-46页 |
| ·结果 | 第46-52页 |
| ·XJ3 HA 和 NA 重组双向转录/翻译质粒的构建 | 第46-47页 |
| ·重组疫苗株 rH3N8-PR 的拯救和鉴定 | 第47页 |
| ·rH3N8-PR 疫苗株对小鼠的免疫学研究 | 第47-48页 |
| ·rH3N8-PR 疫苗株对豚鼠的免疫学研究 | 第48-49页 |
| ·rH3N8-PR 疫苗株对马的免疫学研究 | 第49-52页 |
| ·讨论 | 第52-54页 |
| 第四章 H3N8 亚型 EI 重组腺病毒疫苗的初步研究 | 第54-66页 |
| 摘要 | 第54-55页 |
| ·材料方法 | 第55-59页 |
| ·载体、细胞和菌株 | 第55页 |
| ·试剂和仪器 | 第55页 |
| ·引物的设计与合成 | 第55-56页 |
| ·HA 基因重组腺病毒转移质粒的构建 | 第56页 |
| ·HA 基因重组腺病毒穿梭质粒的构建 | 第56-57页 |
| ·重组腺病毒的获得 | 第57-58页 |
| ·重组腺病毒的电镜观察 | 第58页 |
| ·重组腺病毒表达蛋白的 IPMA 检测 | 第58页 |
| ·重组腺病毒表达 HA 蛋白的 SDS-PAGE 及 Western blot 检测 | 第58页 |
| ·重组腺病毒 rAd-XJ3-HA 复制滴度的测定 | 第58页 |
| ·重组腺病毒 rAd-XJ3-HA 对小鼠的免疫原性研究 | 第58-59页 |
| ·重组腺病毒 rAd-XJ3-HA 对马的免疫原性研究 | 第59页 |
| ·结果 | 第59-64页 |
| ·重组腺病毒转移质粒 pShuttle-XJ3-HA 的构建 | 第59页 |
| ·重组腺病毒穿梭质粒 pAd-XJ3-HA 的构建 | 第59页 |
| ·重组腺病毒 rAd-XJ3-HA 的获得 | 第59页 |
| ·重组腺病毒 rAd-XJ3-HA 的电镜观察 | 第59-61页 |
| ·重组腺病毒 rAd-XJ3-HA 的 HA 蛋白表达检测 | 第61页 |
| ·重组腺病毒 TCID50的测定 | 第61-62页 |
| ·重组腺病毒 rAd-XJ3-HA 对小鼠的免疫原性研究 | 第62页 |
| ·重组腺病毒 rAd-XJ3-HA 对马的免疫原性研究 | 第62-64页 |
| ·讨论 | 第64-66页 |
| 第五章 H3N8 亚型 EI VLPS 疫苗的初步研究 | 第66-80页 |
| 摘要 | 第66页 |
| ·材料方法 | 第66-73页 |
| ·载体、细胞和菌株 | 第66-67页 |
| ·主要试剂和仪器 | 第67页 |
| ·引物的设计与合成 | 第67-68页 |
| ·EIV HA 和 M1 基因重组杆状病毒转移载体的构建 | 第68-71页 |
| ·重组转座子的构建 | 第71-72页 |
| ·重组杆状病毒的制备 | 第72页 |
| ·IPMA 检测蛋白的表达 | 第72-73页 |
| ·Western blot 分析 | 第73页 |
| ·表达蛋白的血凝活性分析 | 第73页 |
| ·VLPs 的电镜观察 | 第73页 |
| ·HA 和 M1 蛋白的定量 | 第73页 |
| ·VLPs 对小鼠的免疫学研究 | 第73页 |
| ·结果 | 第73-78页 |
| ·重组杆状病毒转移载体的构建 | 第73-74页 |
| ·重组转座子 rBac-XJ3-HA-M1 的 PCR 鉴定 | 第74-75页 |
| ·HA 和 M1 蛋白的细胞免疫组化检测 | 第75页 |
| ·HA 和 M1 蛋白的 western blot 分析 | 第75页 |
| ·VLPs 的电镜观察 | 第75-76页 |
| ·VLPs 血凝活性及 HI 检测 | 第76页 |
| ·VLPs 对小鼠的免疫保护 | 第76-78页 |
| ·讨论 | 第78-80页 |
| 第六章 全文结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-92页 |
| 附录 | 第92-95页 |
| 致谢 | 第95-96页 |
| 作者简历 | 第96-97页 |
