| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩写表 | 第9-13页 |
| 1 前言 | 第13-20页 |
| 1.1 研究背景 | 第13-14页 |
| 1.2 光合作用 | 第14-17页 |
| 1.2.1 Rubisco | 第14-16页 |
| 1.2.2 C_4-PEPC | 第16-17页 |
| 1.3 氮对光合作用的影响 | 第17-18页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第18-19页 |
| 1.5 技术路线 | 第19-20页 |
| 2 甘蔗Rubisco、C_4-PEPC基因的克隆 | 第20-31页 |
| 2.1 材料和设备 | 第20-21页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第20页 |
| 2.1.2 菌种和载体 | 第20页 |
| 2.1.3 试验试剂 | 第20页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第20页 |
| 2.1.5 主要试剂的配制 | 第20-21页 |
| 2.2 方法 | 第21-24页 |
| 2.2.1 克隆引物设计 | 第21页 |
| 2.2.2 DNA和RNA提取 | 第21-22页 |
| 2.2.3 目的基因完整CDS的克隆 | 第22页 |
| 2.2.4 构建重组载体 | 第22-23页 |
| 2.2.5 制备DH5α感受态 | 第23页 |
| 2.2.6 重组质粒转化 | 第23页 |
| 2.2.7 阳性克隆的鉴定 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-29页 |
| 2.3.1 DNA和RNA提取 | 第24页 |
| 2.3.2 目的基因完整CDS的PCR扩增 | 第24-25页 |
| 2.3.3 重组质粒的验证 | 第25-26页 |
| 2.3.4 所得CDS序列分析 | 第26-29页 |
| 2.4 讨论 | 第29-30页 |
| 2.5 小结 | 第30-31页 |
| 3 克隆基因rbcS、rbcL和C_4-pepc的原核表达及纯化 | 第31-40页 |
| 3.1 材料和设备 | 第31页 |
| 3.1.1 菌种 | 第31页 |
| 3.1.2 试验试剂 | 第31页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第31页 |
| 3.1.4 主要试剂的配制 | 第31页 |
| 3.2 方法 | 第31-33页 |
| 3.2.1 原核表达菌株Rosetta感受态的制备 | 第31-32页 |
| 3.2.2 重组质粒转化 | 第32页 |
| 3.2.3 融合蛋白的诱导表达 | 第32页 |
| 3.2.4 包涵体的溶解 | 第32页 |
| 3.2.5 融合蛋白的纯化 | 第32-33页 |
| 3.3 结果与分析 | 第33-37页 |
| 3.3.1 融合蛋白的诱导表达 | 第33-34页 |
| 3.3.2 表达条件的优化 | 第34-35页 |
| 3.3.3 融合蛋白的纯化 | 第35-36页 |
| 3.3.4 融合蛋白的浓缩 | 第36-37页 |
| 3.4 讨论 | 第37-39页 |
| 3.5 小结 | 第39-40页 |
| 4 不同施氮水平处理下甘蔗Rubisco、C_4-PEPC基因的表达分析 | 第40-61页 |
| 4.1 材料和设备 | 第40-41页 |
| 4.1.1 材料 | 第40页 |
| 4.1.2 试验试剂 | 第40页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第40-41页 |
| 4.1.4 主要试剂的配制 | 第41页 |
| 4.2 方法 | 第41-44页 |
| 4.2.1 材料处理 | 第41页 |
| 4.2.2 样品采集 | 第41页 |
| 4.2.3 RNA提取 | 第41-42页 |
| 4.2.4 荧光定量引物的设计与筛选 | 第42页 |
| 4.2.5 RNA反转录 | 第42页 |
| 4.2.6 Real-time PCR | 第42页 |
| 4.2.7 蛋白质提取 | 第42-43页 |
| 4.2.8 Western blotting | 第43-44页 |
| 4.2.9 光合速率测定 | 第44页 |
| 4.2.10 数据分析 | 第44页 |
| 4.3 结果与分析 | 第44-56页 |
| 4.3.1 叶片RNA提取 | 第44-46页 |
| 4.3.2 荧光定量引物的筛选 | 第46-48页 |
| 4.3.3 Real-time PCR分析Rubisco、C_4-PEPC基因的转录情况 | 第48-51页 |
| 4.3.3.1 施氮对甘蔗光合酶基因转录的影响 | 第48-50页 |
| 4.3.3.2 不同甘蔗品种不同基因在施氮处理下的表达分析 | 第50-51页 |
| 4.3.4 叶片蛋白质提取 | 第51页 |
| 4.3.5 Western blotting条件优化 | 第51-53页 |
| 4.3.6 Western blotting检测Rubisco、C_4-PEPC蛋白的表达 | 第53-55页 |
| 4.3.7 施氮对净光合速率的影响 | 第55-56页 |
| 4.4 讨论 | 第56-59页 |
| 4.4.1 施氮对甘蔗光合酶基因转录的影响 | 第56-58页 |
| 4.4.2 施氮对甘蔗光合酶蛋白表达的影响 | 第58页 |
| 4.4.3 施氮对甘蔗净光合速率的影响 | 第58-59页 |
| 4.4.4 不同施氮量对甘蔗光合作用的影响 | 第59页 |
| 4.5 小结 | 第59-61页 |
| 5 结论 | 第61-62页 |
| 5.1 全文总结 | 第61页 |
| 5.2 论文创新点 | 第61-62页 |
| 6 展望 | 第62-63页 |
| 参考文献 | 第63-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文目录 | 第72页 |
