| 摘要 | 第3-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 前言 | 第18-22页 |
| 第一部分 内毒素休克小鼠肺血管特异性结合肽筛选 | 第22-35页 |
| 1.1 材料 | 第22-24页 |
| 1.1.1 主要试剂 | 第22页 |
| 1.1.2 主要试剂的配置 | 第22-23页 |
| 1.1.3 主要仪器 | 第23-24页 |
| 1.1.4 实验动物 | 第24页 |
| 1.2 方法 | 第24-28页 |
| 1.2.1 受限于二硫键环内的噬菌体展示七肽库的滴度测定 | 第24-25页 |
| 1.2.2 内毒素休克小鼠模型的复制 | 第25页 |
| 1.2.3 M13噬菌体环七肽库筛选内毒素休克小鼠肺血管结合的噬菌体 | 第25-26页 |
| 1.2.4 M13噬菌体的纯化 | 第26页 |
| 1.2.5 M13噬菌体原种的扩增制备 | 第26页 |
| 1.2.6 DNA扩增M13噬菌体测序模板 | 第26-27页 |
| 1.2.7 噬菌体DNA序列测定及氨基酸序列推导 | 第27-28页 |
| 1.2.8 统计分析 | 第28页 |
| 1.3 结果 | 第28-32页 |
| 1.3.1 噬菌体展示环七肽库的库容鉴定 | 第28-29页 |
| 1.3.2 内毒素休克小鼠模型复制 | 第29页 |
| 1.3.3 内毒素休克小鼠肺血管结合噬菌体富集 | 第29-30页 |
| 1.3.4 正常小鼠体内差减 | 第30-31页 |
| 1.3.5 内毒素休克小鼠肺血管特异性结合噬菌体DNA扩增产物电泳结果 | 第31页 |
| 1.3.6 噬菌体DNA扩增产物的序列测定及噬菌体展示七肽氨基酸序列推导 | 第31-32页 |
| 1.4 讨论 | 第32-35页 |
| 第二部分 内毒素休克小鼠肺血管结合肽生物信息学分析 | 第35-59页 |
| 2.1 材料 | 第35-36页 |
| 2.1.1 序列数据和数据库 | 第35页 |
| 2.1.2 生物信息学分析软件 | 第35-36页 |
| 2.2 方法 | 第36-39页 |
| 2.2.1 噬菌体展示七肽序列的去冗余分析 | 第36页 |
| 2.2.2 三肽残基的计算及丰度统计 | 第36-37页 |
| 2.2.3 三肽丰度的显著性分析 | 第37页 |
| 2.2.4 特征性短肽基序的分析 | 第37-38页 |
| 2.2.5 展示包含特征性短肽基序噬菌体的靶向验证 | 第38页 |
| 2.2.6 包含特征性短肽基序的小鼠源性蛋白查找 | 第38页 |
| 2.2.7 分泌蛋白的预测分析 | 第38-39页 |
| 2.2.8 跨膜蛋白的预测分析 | 第39页 |
| 2.2.9 蛋白的分子功能与参与的生物学过程分析 | 第39页 |
| 2.3 结果 | 第39-54页 |
| 2.3.1 三肽计算及丰度统计 | 第39-40页 |
| 2.3.2 三肽丰度的显著性分析 | 第40页 |
| 2.3.3 特征性短肽基序获得 | 第40页 |
| 2.3.4 展示包含特征性短肽基序噬菌体的靶向验证 | 第40-42页 |
| 2.3.5 包含特征性短肽的小鼠源性蛋白筛选 | 第42页 |
| 2.3.6 分泌蛋白的预测分析 | 第42-45页 |
| 2.3.7 跨膜蛋白的预测分析 | 第45-46页 |
| 2.3.8 特征性短肽基序相应功能蛋白的确定 | 第46-54页 |
| 2.4 讨论 | 第54-59页 |
| 第三部分 CSWASNKFC环七肽的初步功能研究 | 第59-93页 |
| 3.1 材料 | 第59-64页 |
| 3.1.1 主要试剂和试剂盒 | 第59页 |
| 3.1.2 主要配制的试剂 | 第59-63页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第63-64页 |
| 3.1.4 实验动物 | 第64页 |
| 3.1.5 质粒、菌株 | 第64页 |
| 3.2 方法 | 第64-73页 |
| 3.2.1 构建pET-14b-His-EGFP-CSAWSNKFC载体 | 第64-66页 |
| 3.2.2 His-EGFP-CSAWSNKFC融合蛋白诱导表达纯化 | 第66页 |
| 3.2.3 展示CSAWSNKFC噬菌体靶向内毒素休克肺血管的验证 | 第66-67页 |
| 3.2.4 免疫组织化学检测 | 第67页 |
| 3.2.5 His-EGFP-CSAWSNKFC融合蛋白竞争性抑制实验 | 第67-68页 |
| 3.2.6 肺脏组织细胞质膜的制备 | 第68-69页 |
| 3.2.7 肺脏质膜蛋白的制备 | 第69页 |
| 3.2.8 蛋白样品定量 | 第69页 |
| 3.2.9 小鼠肺脏质膜蛋白标志物—Caveolin-1,肺脏质膜ATP酶β亚单位表达量的免疫印迹分析 | 第69-70页 |
| 3.2.10 His-EGFP融合蛋白沉降肺脏质膜蛋白 | 第70页 |
| 3.2.11 蛋白质的双向差异荧光电泳分离 | 第70-72页 |
| 3.2.12 蛋白样品质谱鉴定前的处理 | 第72-73页 |
| 3.2.13 质谱鉴定 | 第73页 |
| 3.2.14 统计学处理 | 第73页 |
| 3.3 结果 | 第73-88页 |
| 3.3.1 展示CSAWSNKFC噬菌体特异性靶向内毒素休克小鼠肺脏 | 第73-76页 |
| 3.3.2 免疫组化鉴定CSAWSNKFC噬菌体血管靶向性和器官靶向性 | 第76-77页 |
| 3.3.3 His-EGFP、His-EGFP-CSAWSNKFC融合蛋白表达与纯化 | 第77-78页 |
| 3.3.4 His-EGFP-CSAWSNKFC竞争性抑制展示CSAWSNKFC噬菌体 | 第78-79页 |
| 3.3.5 肺脏质膜蛋白纯化 | 第79-80页 |
| 3.3.6 蛋白免疫印记验证膜蛋白 | 第80-81页 |
| 3.3.7 内毒素休克小鼠肺血管特异性结合CSAWSNKFC环七肽靶向分子识别 | 第81-87页 |
| 3.3.8 免疫印迹检测肺质膜蛋白ATP酶β亚单位表达 | 第87-88页 |
| 3.4 讨论 | 第88-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-105页 |
| 缩略词表 | 第105-106页 |
| 攻读博士学位期间成果 | 第106-107页 |
| 致谢 | 第107-109页 |
| 统计学证明 | 第109页 |
