| 摘要 | 第8-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 前言 | 第11-22页 |
| 一、埃博拉病毒 | 第11-19页 |
| 1 埃博拉出血热 | 第11-12页 |
| 2 埃博拉病毒分型 | 第12-13页 |
| 3 埃博拉病毒的结构 | 第13-15页 |
| 4 埃博拉病毒侵染细胞机制 | 第15-16页 |
| 5 埃博拉出血热临床症状及传播途径 | 第16-17页 |
| 6 埃博拉出血热治疗手段 | 第17-19页 |
| 二、使用免疫球蛋白进行传染性疾病治疗 | 第19-22页 |
| 研究目的、基础与假设 | 第22-23页 |
| 实验技术路线 | 第23-24页 |
| 实验材料 | 第24-28页 |
| 一、实验试剂、材料、仪器 | 第24-28页 |
| 1 实验主要仪器及产家 | 第24-25页 |
| 2 实验试剂及厂家 | 第25-26页 |
| 3 实验主要试剂及溶液配制 | 第26-28页 |
| 第一章 埃博拉bundibugyo亚型疫苗rAd2-BEBOV GP构建 | 第28-41页 |
| 第一节 实验方法 | 第28-31页 |
| 1 CaCl_2法制备DH5α、Top10与XL-Blue感受态 | 第28-29页 |
| 2 Hanahan法制备BJ5183超级感受态 | 第29页 |
| 3 rAd2-BEBOV GP质粒构建 | 第29-30页 |
| 4 rAd2-BEBOV GP病毒拯救、扩增、纯化 | 第30-31页 |
| 第二节 实验结果与分析 | 第31-40页 |
| 1 Bundibugyo亚型GP蛋白密码子优化 | 第31-33页 |
| 2 携带Bundibugyo亚型GP蛋白优化基因的穿梭质粒pGA1-BEBOV GP的构建 | 第33-36页 |
| 3 利用同源重组获得rAd2-BEBOV GP质粒 | 第36-38页 |
| 4 rAd2-BEBOV GP病毒拯救 | 第38-40页 |
| 第三节 讨论与小结 | 第40-41页 |
| 第二章 利用埃博拉假病毒系统评价不同疫苗免疫后诱导的抗体水平 | 第41-58页 |
| 第一节 实验方法 | 第41-49页 |
| 1 制备埃博拉假病毒包装质粒 | 第41-42页 |
| 1.1 埃博拉假病毒包装质粒转化 | 第41-42页 |
| 1.2 埃博拉假病毒包装质粒鉴定 | 第42页 |
| 1.3 埃博拉假病毒包装质粒的大量制备 | 第42页 |
| 2 包装埃博拉假病毒 | 第42-44页 |
| 2.1 293T细胞培养 | 第43页 |
| 2.2 埃博拉假病毒包装质粒共转染实验 | 第43-44页 |
| 2.3 埃博拉假病毒收集 | 第44页 |
| 3 埃博拉假病毒TCID_(50)确定及病毒中和实验 | 第44-47页 |
| 3.1 Huh7细胞培养 | 第45页 |
| 3.2 埃博拉假病毒TCID_(50)的确定 | 第45-46页 |
| 3.3 假病毒-血清中和实验 | 第46-47页 |
| 4 利用三种埃博拉候选疫苗免疫中国猕猴 | 第47-49页 |
| 4.1 三种埃博拉候选疫苗疫苗信息 | 第47-48页 |
| 4.2 中国猕猴免疫疫苗后采血、分离血清保存 | 第48-49页 |
| 第二节 实验结果与分析 | 第49-57页 |
| 一、埃博拉假病毒的制备 | 第49-52页 |
| 1 鉴定Zaire(1976、2014)、Sudan、Marburg假病毒包装质粒GP基因 | 第49-50页 |
| 2 制备获得的Zaire(1976、2014)/Sudan/MAR假病毒荧光值 | 第50-51页 |
| 3 病毒GP蛋白western blot实验结果 | 第51-52页 |
| 二、利用埃博拉假病毒系统评价不同免疫原诱导的抗体水平 | 第52-57页 |
| 1 免疫不同埃博拉免疫原的小鼠体内诱导的抗体水平 | 第52-54页 |
| 2 免疫不同埃博拉免疫原的中国猕猴体内诱导的抗体水平 | 第54-57页 |
| 第三节 讨论与小结 | 第57-58页 |
| 第三章 中国猕猴抗埃博拉病毒免疫球蛋白纯化 | 第58-69页 |
| 第一节 实验方法 | 第59-63页 |
| 1 蛋白纯化柱子的安装 | 第59页 |
| 2 中国猕猴抗病毒血清样品收集与准备 | 第59-60页 |
| 3 中国猕猴血清免疫球蛋白纯化流程 | 第60页 |
| 4 进一步浓缩纯化获得的免疫球蛋白 | 第60页 |
| 5 对纯化后获得的猕猴免疫球蛋白进行鉴定 | 第60-63页 |
| 5.1 SDS-PAGE蛋白电泳鉴定 | 第61页 |
| 5.2 SDS-PAGE胶考马斯亮蓝染色 | 第61页 |
| 5.3 ELISA法鉴定终产物中IgG的含量 | 第61-62页 |
| 5.4 病毒中和实验鉴定纯化产物中和效价 | 第62-63页 |
| 第二节 实验结果与分析 | 第63-68页 |
| 1 免疫埃博拉抗原的中国猕猴血清中和效价 | 第63页 |
| 2 选择高效价血清进行中国猕猴抗埃博拉总IgG的纯化 | 第63-64页 |
| 3 抗埃博拉中国猕猴血清纯化过程及产物鉴定 | 第64-68页 |
| 第三节 讨论与小结 | 第68-69页 |
| 总结与展望 | 第69-71页 |
| 讨论 | 第71-73页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 综述 | 第76-88页 |
| 参考文献 | 第84-88页 |
| 附录 | 第88-91页 |
| 已发表及待发表文章 | 第91-92页 |
| 致谢 | 第92-93页 |
