摘要 | 第6-8页 |
abstract | 第8-10页 |
文献综述 | 第14-29页 |
第一章 多能性建立的方法和猪多能干细胞研究进展 | 第14-20页 |
1.1 多能性建立的方法 | 第14-18页 |
1.1.1 体细胞融合 | 第14-15页 |
1.1.2 体细胞核移植 | 第15-16页 |
1.1.3 诱导多能干细胞 | 第16-17页 |
1.1.4 重编程过程中表观遗传改变 | 第17-18页 |
1.2 猪多能干细胞研究进展 | 第18-20页 |
1.2.1 猪诱导多能干细胞 | 第18-19页 |
1.2.2 猪胚胎干细胞 | 第19-20页 |
第二章 多能干细胞培养体系的研究进展 | 第20-29页 |
2.1 多能状态的分类 | 第20-22页 |
2.1.1 激发态干细胞(primed) | 第20页 |
2.1.2 初始态干细胞(Na?ve) | 第20-21页 |
2.1.3 激发状态和初始状态的转换 | 第21-22页 |
2.2 维持多能状态的培养条件 | 第22-27页 |
2.2.1 细胞因子 | 第23页 |
2.2.2 小分子抑制剂 | 第23-26页 |
2.2.3 细胞培养基质 | 第26-27页 |
2.3 猪多能干细胞培养条件研究 | 第27-29页 |
2.3.1 猪ES细胞 | 第27-28页 |
2.3.2 猪iPS细胞 | 第28-29页 |
试验研究 | 第29-83页 |
前言 | 第29-31页 |
第三章 猪DOX-iPS细胞系的建立与验证 | 第31-46页 |
3.1 材料和方法 | 第31-39页 |
3.1.1 试验材料 | 第31-33页 |
3.1.2 试验方法 | 第33-39页 |
3.2 结果 | 第39-43页 |
3.2.1 猪DOX-iPS细胞的建立 | 第39页 |
3.2.2 外源质粒插入检测 | 第39-40页 |
3.2.3 多能基因表达谱的检测 | 第40页 |
3.2.4 多能基因蛋白表达情况检测 | 第40-41页 |
3.2.5 核型检测 | 第41-42页 |
3.2.6 猪DOX-iPS细胞体外分化能力检测 | 第42-43页 |
3.3 讨论 | 第43-44页 |
3.4 小结 | 第44-46页 |
第四章 建立Dox调控的细胞重编程体系 | 第46-52页 |
4.1 材料和方法 | 第46-47页 |
4.1.1 试验材料 | 第46页 |
4.1.2 试验方法 | 第46-47页 |
4.2 结果 | 第47-50页 |
4.2.1 培养基中撤除Dox实验 | 第47页 |
4.2.2 鉴定DOX-iPSdiff细胞 | 第47-48页 |
4.2.3 诱导获得DOX-iPS2nd细胞 | 第48-49页 |
4.2.4 DOX-iPSdiff和DOX-iPS2nd细胞多能基因表达分析 | 第49-50页 |
4.3 讨论 | 第50-51页 |
4.4 小结 | 第51-52页 |
第五章 筛选和建立猪i PS的 2i培养条件 | 第52-64页 |
5.1 材料和方法 | 第52-54页 |
5.1.1 试验材料 | 第52-53页 |
5.1.2 试验方法 | 第53-54页 |
5.2 结果 | 第54-62页 |
5.2.1 LF2i培养基中关键因子的筛选 | 第54-55页 |
5.2.2 DOX-iPS细胞内源多能基因表达情况检测 | 第55-56页 |
5.2.3 DOX-iPS内源SOX2激活情况检测 | 第56-57页 |
5.2.4 利用无Dox 2i培养基培养DOX-iPS细胞 | 第57-59页 |
5.2.5 DOX-iPSdiff细胞再诱导重编程 | 第59-60页 |
5.2.6 在 2i和LF2i培养条件下对PEF细胞进行诱导重编程 | 第60-62页 |
5.3 讨论 | 第62-63页 |
5.4 小结 | 第63-64页 |
第六章 3i培养条件的建立 | 第64-83页 |
6.1 材料和方法 | 第64-66页 |
6.1.1 试验材料 | 第64-65页 |
6.1.2 试验方法 | 第65-66页 |
6.2 结果 | 第66-81页 |
6.2.1 不同细胞因子的筛选 | 第66-68页 |
6.2.2 撤除Dox后DOX-iPS细胞AP染色情况 | 第68-69页 |
6.2.3 细胞因子和PL撤除后DOX-iPS细胞的影响 | 第69-70页 |
6.2.4 无Dox的 2i+培养基中DOX-iPS细胞AP染色情况 | 第70-71页 |
6.2.5 小分子抑制剂的筛选 | 第71-73页 |
6.2.6 对MEK1/2 抑制剂浓度的筛选 | 第73-75页 |
6.2.7 3i培养基对DOX-iPS细胞的培养 | 第75-77页 |
6.2.8 培养在 3i条件中的猪DOX-iPS细胞OCT4激活情况检测 | 第77-78页 |
6.2.9 利用 3i培养基培养不同来源的猪多能干细胞 | 第78-81页 |
6.3 讨论 | 第81-82页 |
6.4 小结 | 第82-83页 |
结论 | 第83-84页 |
论文创新点及下一步研究方向 | 第84-85页 |
参考文献 | 第85-95页 |
附录 | 第95-98页 |
缩略词 | 第98-99页 |
致谢 | 第99-100页 |
作者简介 | 第100页 |