| 摘要 | 第6-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 第一章 东南亚三种人参属植物的研究概况 | 第18-39页 |
| 第一部分 越南三七和屏边三七的研究概况 | 第18-19页 |
| 第二部分 三七的研究概况 | 第19-20页 |
| 1.1 三七的生物学特性 | 第20-24页 |
| 1.1.1 三七种子的生物学特性 | 第20-21页 |
| 1.1.2 三七种苗的生物学特性 | 第21-22页 |
| 1.1.3 三七果实的生物学特性 | 第22页 |
| 1.1.4 三七的生殖生物学特性研究 | 第22-23页 |
| 1.1.5 三七的遗传多样性研究 | 第23页 |
| 1.1.6 三七的分子生物学特性研究 | 第23-24页 |
| 1.2 三七化学成分的研究历程和概况 | 第24-31页 |
| 1.2.1 皂苷类成分 | 第24-27页 |
| 1.2.2 非皂苷类成分 | 第27-30页 |
| 1.2.3 小结 | 第30-31页 |
| 1.3 三七皂苷生物合成及其关键酶基因的研究概况 | 第31-36页 |
| 1.3.1 三七总皂苷的生物合成途径研究进展 | 第31-34页 |
| 1.3.2 三七总皂苷的生物合成途径关键酶基因的研究概况 | 第34-36页 |
| 1.4 本研究的目的意义 | 第36-37页 |
| 1.5 本研究的技术路线 | 第37-39页 |
| 第二章 三种人参属植物HPLC代谢图谱的研究 | 第39-54页 |
| 2.1 引言 | 第39-40页 |
| 2.2 材料、试剂与仪器 | 第40-42页 |
| 2.2.1 材料 | 第40-41页 |
| 2.2.2 试剂 | 第41-42页 |
| 2.2.3 仪器 | 第42页 |
| 2.3 方法 | 第42-44页 |
| 2.3.1 皂苷的提取 | 第42-43页 |
| 2.3.2 HPLC分析 | 第43页 |
| 2.3.3 方法学验证 | 第43页 |
| 2.3.4 数据分析 | 第43-44页 |
| 2.4 结果和分析 | 第44-52页 |
| 2.4.1 提取溶剂的选择 | 第44页 |
| 2.4.2 HPLC设备的选择 | 第44-45页 |
| 2.4.3 方法学验证 | 第45-46页 |
| 2.4.4 人参属三种植物指纹图谱的建立和相似性评价 | 第46-48页 |
| 2.4.5 利用指纹图谱区分人参属三种植物及其相似性评价 | 第48-49页 |
| 2.4.6 聚类分析（HCA） | 第49-50页 |
| 2.4.7 主成分分析（PCA） | 第50-52页 |
| 2.5 讨论和小结 | 第52-54页 |
| 第三章 三种人参属植物挥发油成分的比较 | 第54-64页 |
| 3.1 引言 | 第54页 |
| 3.2 材料、试剂与仪器 | 第54-55页 |
| 3.2.1 材料 | 第54-55页 |
| 3.2.2 试剂 | 第55页 |
| 3.2.3 仪器 | 第55页 |
| 3.3 方法 | 第55-56页 |
| 3.3.1 挥发油的提取 | 第55页 |
| 3.3.2 GC-MS（Gas chromatography with mass spectrometry）分析 | 第55-56页 |
| 3.3.3 化合物鉴定 | 第56页 |
| 3.3.4 统计分析 | 第56页 |
| 3.4 结果与讨论 | 第56-62页 |
| 3.4.1 挥发油的产量 | 第56-57页 |
| 3.4.2 挥发油成分 | 第57-61页 |
| 3.4.3 挥发油的多样性 | 第61-62页 |
| 3.4.4 聚类分析 | 第62页 |
| 3.5 小结 | 第62-64页 |
| 第四章 三种人参属植物的遗传多样性及其遗传距离 | 第64-75页 |
| 4.1 引言 | 第64-65页 |
| 4.2 材料、试剂与仪器 | 第65-66页 |
| 4.2.1 材料 | 第65-66页 |
| 4.2.2 试剂 | 第66页 |
| 4.2.3 仪器 | 第66页 |
| 4.3 方法 | 第66-68页 |
| 4.3.1 DNA的提取 | 第66-67页 |
| 4.3.2 SCoT分析 | 第67页 |
| 4.3.3 ITS分析 | 第67页 |
| 4.3.4 数据分析 | 第67-68页 |
| 4.4 结果与分析 | 第68-72页 |
| 4.4.1 SCoT分析 | 第68-69页 |
| 4.4.2 遗传多样性 | 第69-70页 |
| 4.4.3 基于SCoT标记的聚类分析 | 第70-71页 |
| 4.4.4 ITS分析 | 第71-72页 |
| 4.5 讨论和小结 | 第72-75页 |
| 第五章 三七不同部位主要成分的研究 | 第75-92页 |
| 5.1 引言 | 第75-76页 |
| 5.2 材料、试剂与仪器 | 第76-77页 |
| 5.2.1 材料 | 第76页 |
| 5.2.2 试剂 | 第76-77页 |
| 5.2.3 仪器 | 第77页 |
| 5.3 方法 | 第77-80页 |
| 5.3.1 三七种子粗脂肪及其脂肪酸组分分析 | 第77页 |
| 5.3.2 三七种子蛋白质的分析 | 第77-78页 |
| 5.3.3 三七种子氨基酸组分分析 | 第78页 |
| 5.3.4 三七种子糖含量分析 | 第78页 |
| 5.3.5 皂苷提取条件的比较 | 第78-79页 |
| 5.3.6 HPLC分析洗脱梯度的优化 | 第79页 |
| 5.3.7 皂苷分析标准曲线的制作 | 第79页 |
| 5.3.8 HPLC分析的方法学验证 | 第79-80页 |
| 5.3.9 三七不同部位五种主要皂苷三年的积累特性 | 第80页 |
| 5.4 结果与分析 | 第80-90页 |
| 5.4.1 三七种子的粗脂肪及其脂肪酸组分 | 第80-81页 |
| 5.4.2 三七种子的蛋白质含量及其组分 | 第81-82页 |
| 5.4.3 三七种子的氨基酸组分 | 第82-83页 |
| 5.4.4 三七种子的糖含量 | 第83页 |
| 5.4.5 优化的HPLC分析条件 | 第83-84页 |
| 5.4.6 皂苷提取条件的优化 | 第84-86页 |
| 5.4.7 HPLC分析方法学验证 | 第86-88页 |
| 5.4.8 三七不同部位五种主要皂苷三年的积累特性 | 第88-90页 |
| 5.5 讨论和小结 | 第90-92页 |
| 第六章 三七中皂苷合成关键酶基因全长的克隆和分析 | 第92-114页 |
| 6.1 引言 | 第92页 |
| 6.2 材料、试剂与仪器 | 第92-93页 |
| 6.2.1 材料 | 第92页 |
| 6.2.2 试剂 | 第92-93页 |
| 6.2.3 仪器 | 第93页 |
| 6.3 方法 | 第93-99页 |
| 6.3.1 三七总RNA的提取 | 第93-94页 |
| 6.3.2 反转录反应 | 第94-95页 |
| 6.3.3 三七皂苷合成关键酶基因全长的克隆 | 第95-98页 |
| 6.3.4 三七皂苷合成关键酶基因DNA序列的克隆 | 第98页 |
| 6.3.5 利用生物信息学分析三七皂苷合成关键酶基因的序列 | 第98-99页 |
| 6.4 结果与分析 | 第99-113页 |
| 6.4.1 三七总RNA的提取与检测 | 第99页 |
| 6.4.2 三七皂苷合成4个关键酶基因cDNA全长序列的获得 | 第99-100页 |
| 6.4.3 三七皂苷合成4个关键酶基因序列的分析 | 第100-113页 |
| 6.5 讨论和小结 | 第113-114页 |
| 第七章 三七中皂苷合成关键酶的亚细胞定位 | 第114-126页 |
| 7.1 引言 | 第114页 |
| 7.2 材料、试剂与仪器 | 第114-115页 |
| 7.2.1 材料 | 第114页 |
| 7.2.2 试剂及耗材 | 第114-115页 |
| 7.2.3 培养基 | 第115页 |
| 7.2.4 仪器 | 第115页 |
| 7.3 试验方法 | 第115-120页 |
| 7.3.1 亚细胞定位引物的设计 | 第115页 |
| 7.3.2 PCR反应获得目标序列 | 第115-116页 |
| 7.3.3 PCR产物的加―A‖反应 | 第116页 |
| 7.3.4 PCR产物的纯化回收 | 第116页 |
| 7.3.5 回收产物连接到克隆pMD19-T Simple Vector上 | 第116页 |
| 7.3.6 感受态细胞的转化及阳性克隆筛选 | 第116页 |
| 7.3.7 含有4个目的基因质粒和pA7-GFP载体质粒的获取 | 第116-117页 |
| 7.3.8 含有4个目的基因质粒和pA7-GFP载体质粒的双酶切反应 | 第117-118页 |
| 7.3.9 双酶切反应产物的纯化回收 | 第118页 |
| 7.3.10 回收的目的基因质粒与pA7-GFP载体质粒的连接反应 | 第118页 |
| 7.3.11 连接产物转化至感受态细胞和单克隆筛选 | 第118页 |
| 7.3.12 重组质粒的获得 | 第118页 |
| 7.3.13 基因枪转化洋葱表皮细胞 | 第118-120页 |
| 7.3.14 对细胞核进行染色 | 第120页 |
| 7.4 结果与分析 | 第120-124页 |
| 7.4.1 重组质粒的检测 | 第120页 |
| 7.4.2 绿色荧光蛋白融合表达载体A7-FPPS、A7-SS、A7-SE和A7-DS的构建 | 第120-122页 |
| 7.4.3 重组质粒的菌落PCR鉴定 | 第122页 |
| 7.4.4 重组质粒在洋葱表皮细胞中的瞬时表达 | 第122-124页 |
| 7.5 讨论和小结 | 第124-126页 |
| 第八章 三七中皂苷合成关键酶基因的原核表达研究 | 第126-136页 |
| 8.1 引言 | 第126页 |
| 8.2 材料、试剂与仪器 | 第126-127页 |
| 8.2.1 材料 | 第126页 |
| 8.2.2 试剂 | 第126页 |
| 8.2.3 仪器 | 第126-127页 |
| 8.3 试验方法 | 第127-131页 |
| 8.3.1 原核表达引物的设计 | 第127页 |
| 8.3.2 PCR反应获得目标序列 | 第127页 |
| 8.3.3 反应产物加―A‖反应和PCR产物的跑胶回收 | 第127页 |
| 8.3.4 原核表达载体pMAL-c2X质粒的获得 | 第127-128页 |
| 8.3.5 纯化回收产物和pMAL-c2X载体质粒的双酶切反应 | 第128页 |
| 8.3.6 双酶切产物的纯化回收 | 第128页 |
| 8.3.7 PCR片段与pMAL-c2X质粒的连接 | 第128-129页 |
| 8.3.8 连接产物转化至感受态细胞和克隆筛选 | 第129页 |
| 8.3.9 原核表达重组质粒的获得 | 第129页 |
| 8.3.10 E.coli Rosetta感受态的制作 | 第129页 |
| 8.3.11原核表达重组质粒转化至E.coli Rosetta工程菌及其克隆筛选 | 第129页 |
| 8.3.12三七中皂苷合成关键酶基因的原核表达诱导 | 第129-130页 |
| 8.3.13原核表达产物SDS-PAGE电泳分析 | 第130-131页 |
| 8.3.14鉴定蛋白是包涵体还是可溶性蛋白 | 第131页 |
| 8.4 结果与分析 | 第131-134页 |
| 8.4.1 原核表达载体pM-FPPS、pM-SS、pM-SE和pM-DS的构建 | 第131-132页 |
| 8.4.2 重组质粒转化菌株E.coli Rosetta的菌落PCR鉴定 | 第132-133页 |
| 8.4.3 原核表达的SDS-PAGE结果 | 第133-134页 |
| 8.4.4 原核表达蛋白的可溶性鉴定 | 第134页 |
| 8.5 讨论和小结 | 第134-136页 |
| 第九章 总结论和创新点 | 第136-138页 |
| 9.1 总结论 | 第136-137页 |
| 9.2 创新点 | 第137-138页 |
| 参考文献 | 第138-156页 |
| 附录 | 第156-157页 |
| 致谢 | 第157-158页 |
| 作者简介 | 第158-159页 |
