| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-13页 |
| 文献综述 | 第13-24页 |
| 第一章 TGEV 及其 ORF7 研究进展 | 第13-24页 |
| ·TGEV 基因组结构研究进展 | 第14-15页 |
| ·TGEV 与宿主细胞相互关系研究进展 | 第15-16页 |
| ·TGEV 检测技术研究进展 | 第16-19页 |
| ·病毒分离鉴定 | 第16页 |
| ·酶联免疫吸附试验（ELISA） | 第16-17页 |
| ·原位杂交技术 | 第17页 |
| ·聚合酶链反应（PCR）检测方法 | 第17-18页 |
| ·基因芯片技术 | 第18-19页 |
| ·TGEV ORF7 研究进展 | 第19-24页 |
| ·TGEV ORF7 进化研究进展 | 第19-20页 |
| ·TGEV ORF7 对病毒毒力的调节作用 | 第20-21页 |
| ·TGEV ORF7 调节宿主细胞的防御反应 | 第21-22页 |
| ·TGEV ORF7 在其他方面的研究进展 | 第22-24页 |
| 试验研究 | 第24-57页 |
| 第二章 TGEV 实时荧光定量 RT-PCR 检测方法的建立 | 第24-36页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·病毒、菌株、载体和细胞来源 | 第24-25页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25页 |
| ·主要培养基的配制 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·引物设计与合成 | 第26页 |
| ·病毒增殖 | 第26页 |
| ·PCR 扩增 | 第26-27页 |
| ·PCR 产物回收纯化 | 第27页 |
| ·目的片段与载体连接、转化 | 第27页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第27-28页 |
| ·实时荧光定量 PCR 方法的建立 | 第28-29页 |
| ·结果 | 第29-33页 |
| ·N 基因的 PCR 扩增结果 | 第29页 |
| ·质粒标准品的鉴定结果 | 第29-30页 |
| ·荧光定量 PCR 方法的建立 | 第30-33页 |
| ·讨论 | 第33-34页 |
| ·小结 | 第34-36页 |
| 第三章 真核表达载体 GFP-ORF7 和 ORF7-GFP 的构建与细胞转染和鉴定 | 第36-48页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·病毒、菌株、载体和细胞来源 | 第36页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第36页 |
| ·主要仪器 | 第36-37页 |
| ·主要液体的配制 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-42页 |
| ·真核表达载体 GFP-ORF7 和 ORF7-GFP 的构建 | 第37-39页 |
| ·重组质粒的细胞转染与鉴定 | 第39-42页 |
| ·结果 | 第42-46页 |
| ·ORF7 的 PCR 扩增 | 第42页 |
| ·重组质粒的 PCR 扩增 | 第42-43页 |
| ·重组质粒的双酶切鉴定 | 第43页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第43-44页 |
| ·重组质粒的细胞转染 | 第44页 |
| ·表达产物的 RT-PCR 鉴定 | 第44-45页 |
| ·表达产物的 Western blot 鉴定 | 第45-46页 |
| ·讨论 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 第四章 ORF7 蛋白的亚细胞定位及过表达 ORF7 后对病毒影响的初步研究 | 第48-57页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·细胞、病毒和重组质粒 | 第48页 |
| ·主要试剂及试剂盒 | 第48页 |
| ·主要仪器与设备 | 第48页 |
| ·主要液体的配制 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-50页 |
| ·引物设计 | 第49页 |
| ·TGEV ORF7 蛋白的亚细胞定位 | 第49页 |
| ·过表达 ORF7 后对 TGEV 病毒 N 基因表达量的影响 | 第49-50页 |
| ·过表达 ORF7 后对 TGEV 病毒含量的影响 | 第50页 |
| ·结果 | 第50-55页 |
| ·ORF7 蛋白的亚细胞定位结果 | 第50-52页 |
| ·过表达 ORF7 后对 TGEV N 基因表达量的影响 | 第52-54页 |
| ·过表达 ORF7 后对 TGEV 病毒含量的影响 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-64页 |
| 缩略词 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简介 | 第66页 |
