穿膜肽介导的眼内基因递送系统
| 摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-11页 |
| 缩略语表 | 第12-13页 |
| 前言 | 第13-18页 |
| 第一章 穿膜肽的筛选与评价 | 第18-44页 |
| 第一节 备选穿膜肽基本信息 | 第18-20页 |
| 1 穿膜肽一级结构信息 | 第18页 |
| 2 穿膜肽二级结构信息 | 第18-20页 |
| 第二节 穿膜肽的体外细胞学评价 | 第20-26页 |
| 1 仪器与材料 | 第20-21页 |
| 1.1 仪器 | 第20页 |
| 1.2 材料 | 第20页 |
| 1.3 细胞株 | 第20-21页 |
| 2 实验方法 | 第21-22页 |
| 2.1 NHC细胞的培养 | 第21页 |
| 2.2 穿膜肽的细胞毒实验 | 第21-22页 |
| 2.3 穿膜肽的细胞摄取定性评价 | 第22页 |
| 2.4 穿膜肽的细胞摄取定量评价 | 第22页 |
| 3 结果 | 第22-26页 |
| 3.1 穿膜肽的细胞毒性 | 第22-23页 |
| 3.2 穿膜肽的细胞摄取能力定性评价 | 第23-24页 |
| 3.3 优选穿膜肽细胞摄取能力定量评价 | 第24-26页 |
| 4 讨论与小结 | 第26页 |
| 第三节 穿膜肽的离体及体内水平评价 | 第26-34页 |
| 1 仪器与材料 | 第26-27页 |
| 1.1 仪器 | 第26-27页 |
| 1.2 材料 | 第27页 |
| 2 实验方法 | 第27-28页 |
| 2.1 家兔离体角膜透过性实验 | 第27-28页 |
| 2.2 大鼠在体结膜囊内给药实验 | 第28页 |
| 3 结果 | 第28-33页 |
| 3.1 穿膜肽表观透过系数测定 | 第28-29页 |
| 3.2 离体角膜毒性测定 | 第29-32页 |
| 3.2.1 角膜水化值测定 | 第29-30页 |
| 3.2.2 角膜结构完整性 | 第30-31页 |
| 3.2.3 穿膜肽在离体角膜内的分布 | 第31-32页 |
| 3.3 穿膜肽在体眼组织分布 | 第32-33页 |
| 4 讨论与小结 | 第33-34页 |
| 第四节 穿膜肽的空间构型研究 | 第34-36页 |
| 1 仪器与材料 | 第34页 |
| 2 实验方法 | 第34页 |
| 3 结果 | 第34-35页 |
| 4 讨论与小结 | 第35-36页 |
| 第五节 D构型穿膜肽的体内外评价 | 第36-42页 |
| 1 仪器与材料 | 第36-37页 |
| 1.1 仪器 | 第36页 |
| 1.2 D构型穿膜肽 | 第36页 |
| 1.3 其他材料 | 第36-37页 |
| 2 实验方法 | 第37-38页 |
| 2.1 NHC细胞的培养 | 第37页 |
| 2.2 穿膜肽的细胞毒实验 | 第37页 |
| 2.3 穿膜肽的细胞摄取定性评价 | 第37-38页 |
| 2.4 家兔离体角膜透过性实验 | 第38页 |
| 2.5 圆二色谱实验 | 第38页 |
| 3 结果 | 第38-42页 |
| 3.1 D构型穿膜肽的细胞毒性 | 第38-39页 |
| 3.2 D构型穿膜肽的细胞摄取能力定性评价 | 第39-40页 |
| 3.3 D构型穿膜肽的表观透过系数测定 | 第40页 |
| 3.4 D构型穿膜肽的角膜水化值测定 | 第40-41页 |
| 3.5 D构型穿膜肽在离体角膜内的分布 | 第41页 |
| 3.6 D构型穿膜肽的空间构型研究 | 第41-42页 |
| 4 讨论与小结 | 第42页 |
| 本章小结 | 第42-44页 |
| 第二章 眼内基因递送系统的制备与表征 | 第44-58页 |
| 第一节 报告基因的制备与纯化 | 第44-47页 |
| 1 仪器与材料 | 第44-45页 |
| 1.1 仪器 | 第44页 |
| 1.2 材料 | 第44-45页 |
| 2 实验方法 | 第45-46页 |
| 2.1 LB培养基的制备 | 第45页 |
| 2.2 质粒DNA的提取与纯化 | 第45-46页 |
| 2.2.1 质粒DNA的小量提取 | 第45页 |
| 2.2.2 质粒DNA的大量提取 | 第45-46页 |
| 2.3 质粒DNA的表征 | 第46页 |
| 2.3.1 质粒DNA的浓度测定 | 第46页 |
| 2.3.2 质粒DNA的纯度检测 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-47页 |
| 4 讨论与小结 | 第47页 |
| 第二节 眼内基因递送系统的处方筛选与制备 | 第47-53页 |
| 1 仪器与材料 | 第48-49页 |
| 1.1 仪器 | 第48-49页 |
| 1.2 材料 | 第49页 |
| 1.2.1 低分子量分枝状阳离子聚合物 | 第49页 |
| 1.2.2 其他材料 | 第49页 |
| 2 实验方法 | 第49-51页 |
| 2.1 物理复合物的制备 | 第49-50页 |
| 2.2 物理复合物各组分比例筛选 | 第50-51页 |
| 2.2.1 琼脂糖凝胶电泳法 | 第50页 |
| 2.2.2 溴乙锭荧光法 | 第50-51页 |
| 3 结果 | 第51-52页 |
| 3.1 PRFP/P复合物电荷比筛选 | 第51页 |
| 3.2 PRFP/LBCP的氮磷比筛选 | 第51-52页 |
| 3.3 PRFP/LBCP/P的电荷比筛选 | 第52页 |
| 4 讨论与小结 | 第52-53页 |
| 第三节 眼内基因递送系统的表征 | 第53-57页 |
| 1 仪器与材料 | 第53页 |
| 1.1 仪器 | 第53页 |
| 1.2 材料 | 第53页 |
| 2 实验方法 | 第53-54页 |
| 2.1 眼内基因递送系统的验证 | 第53-54页 |
| 2.2 眼内基因递送系统的粒径测定 | 第54页 |
| 2.3 眼内基因递送系统的形态学观察 | 第54页 |
| 3 结果 | 第54-56页 |
| 3.1 眼内基因递送系统的验证 | 第54页 |
| 3.2 眼内基因递送系统的粒径分布 | 第54-55页 |
| 3.3 眼内基因递送系统的形态学检测 | 第55-56页 |
| 4 讨论与小结 | 第56-57页 |
| 本章小结 | 第57-58页 |
| 第三章 眼内基因递送系统的体内外评价 | 第58-74页 |
| 第一节 眼内基因递送系统的体外评价 | 第58-68页 |
| 1 仪器与材料 | 第58-59页 |
| 1.1 仪器 | 第58页 |
| 1.2 材料 | 第58-59页 |
| 1.3 细胞株 | 第59页 |
| 2 实验方法 | 第59-61页 |
| 2.1 SDHCEC细胞培养 | 第59页 |
| 2.2 LBCP的细胞毒实验 | 第59页 |
| 2.3 眼内基因递送系统的细胞转染定量评价 | 第59-60页 |
| 2.4 基因递送系统的细胞转染定性观察 | 第60页 |
| 2.5 基因递送系统的作用机理探究 | 第60-61页 |
| 3 结果 | 第61-68页 |
| 3.1 LBCP的细胞毒性 | 第61-62页 |
| 3.2 眼内基因递送系统的细胞转染定量测定 | 第62-65页 |
| 3.2.1 角膜细胞转染的定量测定 | 第62-63页 |
| 3.2.2 结膜细胞转染的定量测定 | 第63-65页 |
| 3.3 基因递送系统的细胞转染定性观察 | 第65-66页 |
| 3.4 基因递送系统的作用机理探究 | 第66-68页 |
| 4 讨论与小结 | 第68页 |
| 第二节 眼内基因递送系统体内转染评价 | 第68-70页 |
| 1 仪器与材料 | 第68-69页 |
| 1.1 仪器 | 第68页 |
| 1.2 材料 | 第68-69页 |
| 2 实验方法 | 第69页 |
| 3 结果 | 第69-70页 |
| 4 讨论与小结 | 第70页 |
| 第三节 眼内基因递送系统体内药动学评价 | 第70-73页 |
| 1 仪器与材料 | 第70页 |
| 1.1 仪器 | 第70页 |
| 1.2 材料 | 第70页 |
| 2 实验方法 | 第70-71页 |
| 3 结果 | 第71-73页 |
| 4 讨论与小结 | 第73页 |
| 本章小结 | 第73-74页 |
| 全文总结 | 第74-75页 |
| 对本课题的设想及建议 | 第75-76页 |
| 硕士期间研究成果 | 第76-77页 |
| 参考文献 | 第77-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
