| 摘要 | 第3-5页 |
| Abstract | 第5-6页 |
| 简称 | 第7-10页 |
| 一、前言 | 第10-17页 |
| 1、G蛋白偶联受体-GPCRs（G protein coupled receptors） | 第10-12页 |
| 2、常用蛋白质相互作用的研究方法 | 第12-16页 |
| 2.1 免疫共沉淀技术( co- immunoprecipitation，Co-IP) | 第13页 |
| 2.2 荧光共振能量转移技术（FRET） | 第13-14页 |
| 2.3 生物发光共振能量转移技术（BRET） | 第14-16页 |
| 3、实验设计和技术路线 | 第16-17页 |
| 二、材料和方法 | 第17-30页 |
| （一）实验材料 | 第17-20页 |
| 1、细胞、质粒及菌株 | 第17页 |
| 2、实验抗体 | 第17页 |
| 3、生化分子试剂及试剂盒 | 第17-19页 |
| 5. 仪器设备 | 第19-20页 |
| (二) 实验方法 | 第20-30页 |
| 1 质粒重组 | 第20-23页 |
| 2 细胞培养 | 第23-24页 |
| 2.1 细胞传代 | 第23-24页 |
| 2.2 细胞复苏 | 第24页 |
| 2.3 细胞冻存 | 第24页 |
| 2.4 细胞的瞬时转染 | 第24页 |
| 3、激光共聚焦扫描显微镜检测OX1R和CCK1R胞内共定位的表达 | 第24-25页 |
| 4、BRET检测OX1R和CCK1R的异源二聚化 | 第25-26页 |
| 5、FRET检测OX1R和CCK1R的异源二聚化 | 第26页 |
| 6、免疫共沉淀验证OX1R和CCK1R的异源二聚化 | 第26-28页 |
| 7、双荧光素酶法检测细胞内报告基因 SRE、CRE、NFAT 和 SRF 的含量 | 第28-30页 |
| 三、结果 | 第30-42页 |
| 1. 构建重组质粒EGFP-CCK1R | 第30-31页 |
| 2. 重组质粒EGFP-CCK1R在细胞内的表达 | 第31页 |
| 3、激光共聚焦扫描显微镜检测OX1R和CCK1R的共定位表达 | 第31-32页 |
| 4、BRET技术检测OX1R和CCK1R的异源二聚化 | 第32-35页 |
| 4.1 BRET~1检测OX1R和CCK1R的相互作用 | 第32-33页 |
| 4.2 eBRET检测配体对OX1R和CCK1R相互作用的影响 | 第33-34页 |
| 4.3 BRET饱和实验 | 第34-35页 |
| 5、FRET技术检测OX1R和CCK1R的异源二聚化 | 第35-37页 |
| 6、免疫共沉淀检测OX1R和CCK1R的异源二聚化 | 第37-38页 |
| 7、双荧光素酶法检测细胞内报告基因CRE、SRE和NFAT的含量 | 第38-42页 |
| 四、讨论 | 第42-44页 |
| 五、结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-48页 |
| 综述 | 第48-56页 |
| 参考文献 | 第54-56页 |
| 在读期间发表的学术论文及研究成果 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57页 |
