| 摘要 | 第4-6页 |
| ABSTRACT | 第6-8页 |
| 缩略词表 | 第9-12页 |
| 第一章 CRISPR/Cas9系统概述 | 第12-17页 |
| 1 CRISPR-Cas9的研究进程 | 第12-13页 |
| 2 CRISPR-Cas9的基因座结构 | 第13页 |
| 3 CRISPR-Cas9的作用原理 | 第13-14页 |
| 4 CRISPR-Cas9在动物基因编辑上的应用 | 第14-15页 |
| 5 CRISPR-Cas9系统的优势与局限 | 第15页 |
| 6 结语 | 第15-17页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9介导绒山羊Tβ4基因定点敲入的研究 | 第17-49页 |
| 1 引言 | 第17-19页 |
| 1.1 Tβ4基因定点整合载体的构建 | 第17-18页 |
| 1.2 Tβ4基因定点整合单克隆细胞系的获得 | 第18页 |
| 1.3 Tβ4基因定点整合绒山羊的制备 | 第18-19页 |
| 2 材料和方法 | 第19-32页 |
| 2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2.1.2 试剂与耗材 | 第19-20页 |
| 2.1.3 实验材料 | 第20页 |
| 2.2 方法 | 第20-32页 |
| 2.2.1 Tβ4基因定点整合载体的构建 | 第20-27页 |
| 2.2.2 Tβ4基因定点整合单克隆细胞系的获得 | 第27-30页 |
| 2.2.3 Tβ4基因定点整合绒山羊的制备 | 第30-32页 |
| 3 结果 | 第32-45页 |
| 3.1 Tβ4基因定点整合载体的构建 | 第32-36页 |
| 3.1.1 gRNA表达载体的构建 | 第32-33页 |
| 3.1.2 SURVEYOR酶切效率检测 | 第33页 |
| 3.1.3 Tβ4基因的获得 | 第33-34页 |
| 3.1.4 上下游同源臂的获得 | 第34页 |
| 3.1.5 Tβ4同源重组载体的构建 | 第34-36页 |
| 3.2 Tβ4基因定点整合单克隆细胞系的获得 | 第36-41页 |
| 3.2.1 单克隆细胞系的获得 | 第36页 |
| 3.2.2 Tβ4基因随机整合细胞系的鉴定 | 第36-38页 |
| 3.2.3 Tβ4基因定点整合细胞系的鉴定 | 第38-41页 |
| 3.3 Tβ4基因定点整合绒山羊的制备 | 第41-45页 |
| 3.3.1 卵母细胞的采集与体外成熟 | 第41-42页 |
| 3.3.2 重构胚的构建及融合 | 第42页 |
| 3.3.3 重构胚的体外培养及移植 | 第42-43页 |
| 3.3.4 转基因绒山羊的接产及鉴定 | 第43-45页 |
| 4 讨论 | 第45-49页 |
| 4.1 Tβ4 基因定点整合载体的构建 | 第45-46页 |
| 4.2 Tβ4基因定点整合单克隆细胞系的获得 | 第46-47页 |
| 4.3 Tβ4基因定点整合绒山羊的制备 | 第47-49页 |
| 结论 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-60页 |
| 附录 | 第60-62页 |
| 致谢 | 第62页 |