| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 英文摘要 | 第9-10页 |
| 1 前言 | 第11-25页 |
| 1.1 乳腺泌乳及乳脂合成机理 | 第11-14页 |
| 1.1.1 乳腺泌乳过程及调节机制 | 第11-12页 |
| 1.1.2 乳的生物化学组成 | 第12页 |
| 1.1.3 乳脂合成机理及调控 | 第12-14页 |
| 1.2 乳脂合成相关信号通路 | 第14-23页 |
| 1.2.1 SREBPs研究进展 | 第14-19页 |
| 1.2.2 PPARs研究进展 | 第19-22页 |
| 1.2.3 JAK-Stat5信号通路 | 第22页 |
| 1.2.4 mTOR途径 | 第22-23页 |
| 1.3 乳脂合成关键基因的研究进展 | 第23-24页 |
| 1.4 本研究的目的与意义 | 第24-25页 |
| 2 材料与方法 | 第25-35页 |
| 2.1 实验试剂和仪器 | 第25-26页 |
| 2.1.1 实验试剂 | 第25页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第25-26页 |
| 2.2 实验方法 | 第26-34页 |
| 2.2.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养与鉴定 | 第26页 |
| 2.2.2 SREBP1基因沉寂分析 | 第26-30页 |
| 2.2.3 SREBP1过表达分析 | 第30-33页 |
| 2.2.4 硬脂酸及血清对乳脂合成影响 | 第33-34页 |
| 2.3 数据分析 | 第34-35页 |
| 3 结果与分析 | 第35-60页 |
| 3.1 奶牛乳腺上皮细胞的培养及鉴定 | 第35-36页 |
| 3.2 奶牛乳腺上皮细胞SREBP1基因沉寂分析 | 第36-44页 |
| 3.2.1 最佳抑制效果siRNA的筛选 | 第36-38页 |
| 3.2.2 SREBP1基因沉寂效率 | 第38页 |
| 3.2.3 SREBP1基因沉寂对乳脂合成相关基因的影响 | 第38-39页 |
| 3.2.4 SREBP1基因沉寂对乳腺上皮细胞蛋白表达的影响 | 第39-40页 |
| 3.2.5 IF检测SREBP1与p-mTOR的表达与定位 | 第40-42页 |
| 3.2.6 乳腺上皮细胞脂滴含量测定 | 第42-43页 |
| 3.2.7 乳腺上皮细胞甘油三酯含量测定 | 第43-44页 |
| 3.3 奶牛乳腺上皮细胞SREBP1过表达分析 | 第44-53页 |
| 3.3.1 SREBP1基因PCR扩增结果 | 第44-45页 |
| 3.3.2 重组质粒pMD18-T-SREBP1的构建及PCR验证 | 第45-46页 |
| 3.3.3 重组质粒pGCMV/IRES/EGFP/SREBP1的构建及PCR验证 | 第46-47页 |
| 3.3.4 质粒pGCMV/IRES/EGFP/SREBP1转染至奶牛乳腺上皮细胞 | 第47页 |
| 3.3.5 SREBP1过表达对乳脂合成相关基因的影响 | 第47-48页 |
| 3.3.6 SREBP1过表达对乳腺上皮细胞蛋白表达的影响 | 第48-49页 |
| 3.3.7 IF法检测SREBP1与p-mTOR表达与定位 | 第49-51页 |
| 3.3.8 乳腺上皮细胞脂滴含量测定 | 第51-52页 |
| 3.3.9 乳腺上皮细胞甘油三酯含量测定 | 第52-53页 |
| 3.4 硬脂酸及血清对奶牛乳腺上皮细胞SREBP1与mTOR合成影响 | 第53-60页 |
| 3.4.1 硬脂酸及血清对乳脂合成相关基因的影响 | 第53-54页 |
| 3.4.2 硬脂酸及血清对乳腺上皮细胞蛋白表达的影响 | 第54-55页 |
| 3.4.3 IF法检测SREBP1与p-mTOR表达与定位 | 第55-57页 |
| 3.4.4 乳腺上皮细胞脂滴含量测定 | 第57-59页 |
| 3.4.5 乳腺上皮细胞甘油三酯含量测定 | 第59-60页 |
| 4 讨论 | 第60-64页 |
| 4.1 奶牛乳腺上皮细胞模型的建立 | 第60页 |
| 4.2 SREBP1的不同修饰及加工形式与功能的关系 | 第60-61页 |
| 4.3 SREBP1基因沉寂对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成影响 | 第61-62页 |
| 4.4 SREBP1基因过表达对奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成影响 | 第62页 |
| 4.5 奶牛乳腺上皮细胞乳脂合成模型的建立 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-72页 |
| 附录 | 第72-74页 |
| 攻读博士学位期间发表的学术论文 | 第74页 |
