| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 引言 | 第11-17页 |
| 1.1 绵羊发情性状研究进展 | 第11-12页 |
| 1.2 BAD基因研究进展 | 第12-14页 |
| 1.2.1 BAD基因在细胞凋亡中作用 | 第12-13页 |
| 1.2.2 BAD基因在卵巢上的研究 | 第13-14页 |
| 1.3 孕酮和雌二醇 | 第14-15页 |
| 1.4 RNAi干扰技术研究进展 | 第15页 |
| 1.4.1 RNAi定义 | 第15页 |
| 1.4.2 RNAi的发展及应用 | 第15页 |
| 1.5 颗粒细胞研究进展 | 第15-17页 |
| 第二章 试验材料与方法 | 第17-28页 |
| 2.1 试验材料 | 第17-19页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第17页 |
| 2.1.2 试验细胞 | 第17页 |
| 2.1.3 主要试剂 | 第17-18页 |
| 2.1.4 主要仪器设备 | 第18-19页 |
| 2.1.5 主要分析软件与网站 | 第19页 |
| 2.2 试验方法 | 第19-28页 |
| 2.2.1 主要试剂的配制 | 第19页 |
| 2.2.2 小尾寒羊原代卵泡颗粒细胞培养 | 第19-20页 |
| 2.2.3 卵泡颗粒细胞传代 | 第20页 |
| 2.2.4 细胞计数 | 第20-21页 |
| 2.2.5 颗粒细胞鉴定 | 第21页 |
| 2.2.6 BAD基因CDS区序列扩增 | 第21-22页 |
| 2.2.7 BAD-siRNA分子设计、合成及筛选 | 第22页 |
| 2.2.8 BAD-siRNA转染 | 第22-23页 |
| 2.2.9 干扰后检测颗粒细胞分泌孕酮和雌二醇的浓度 | 第23页 |
| 2.2.10 细胞总RNA提取 | 第23-24页 |
| 2.2.11 蛋白质提取 | 第24页 |
| 2.2.12 BCA法测定蛋白质浓度 | 第24-25页 |
| 2.2.13 Westorn-blot | 第25-26页 |
| 2.2.14 免疫荧光染色 | 第26页 |
| 2.2.15 反转录合成cDNA | 第26-27页 |
| 2.2.16 荧光定量PCR | 第27页 |
| 2.2.17 统计分析 | 第27-28页 |
| 第三章 试验结果与分析 | 第28-36页 |
| 3.1 荧光定量PCR验证RNA-seq结果 | 第28页 |
| 3.2 小尾寒羊原代卵泡颗粒细胞 | 第28-29页 |
| 3.2.1 小尾寒羊原代卵泡颗粒细胞培养 | 第28-29页 |
| 3.3 小尾寒羊卵巢颗粒细胞形态学观察及鉴定 | 第29-30页 |
| 3.4 BAD基因CDS区克隆测序 | 第30页 |
| 3.5 BAD- siRNA干扰实验 | 第30-36页 |
| 3.5.1 筛选BAD-siRNA干扰分子及其转染浓度 | 第30-31页 |
| 3.5.2 绵羊 β-actin、BAD基因荧光定量PCR检测结果 | 第31-32页 |
| 3.5.3 干扰后 BAD 在 m RNA 水平的表达变化 | 第32-33页 |
| 3.5.4 干扰后BAD在蛋白质水平的表达变化 | 第33-34页 |
| 3.5.5 细胞免疫荧光染色法检测干扰后BAD在蛋白质水平的表达变化 | 第34页 |
| 3.5.6 干扰后颗粒细胞分泌孕酮和雌二醇的变化 | 第34-36页 |
| 第四章 讨论 | 第36-39页 |
| 第五章 全文结论 | 第39-40页 |
| 参考文献 | 第40-45页 |
| 附录 | 第45-46页 |
| 致谢 | 第46-48页 |
| 个人简历 | 第48页 |
