| 摘要 | 第5-6页 |
| abstract | 第6页 |
| 英文缩略表 | 第10-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 细胞毒性颗粒 | 第11-12页 |
| 1.2 颗粒酶 | 第12-16页 |
| 1.2.1 颗粒酶的表达 | 第12页 |
| 1.2.2 穿孔素介导颗粒酶进入靶细胞模型 | 第12页 |
| 1.2.3 颗粒酶引起程序性细胞死亡 | 第12-15页 |
| 1.2.4 颗粒酶的清除病原体作用 | 第15-16页 |
| 1.3 颗粒溶素 | 第16-18页 |
| 1.3.1 颗粒溶素的表达 | 第16页 |
| 1.3.2 颗粒溶素的结构及作用机制 | 第16-17页 |
| 1.3.3 颗粒溶素的功能 | 第17-18页 |
| 1.4 小结 | 第18-19页 |
| 第二章 鸡颗粒酶A和颗粒酶K基因的克隆及表达 | 第19-30页 |
| 2.1 实验材料与方法 | 第19-21页 |
| 2.1.1 主要实验试剂 | 第19页 |
| 2.1.2 主要仪器设备 | 第19页 |
| 2.1.3 实验动物 | 第19页 |
| 2.1.4 鸡脾脏总RNA的提取与反转录 | 第19-20页 |
| 2.1.5 鸡颗粒酶A和颗粒酶K基因的克隆 | 第20页 |
| 2.1.6 颗粒酶A和颗粒酶K基因序列分析 | 第20页 |
| 2.1.7 颗粒酶A和颗粒酶K表达质粒的构建 | 第20页 |
| 2.1.8 颗粒酶A和颗粒酶K融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第20-21页 |
| 2.1.9 WESTERN BLOT分析 | 第21页 |
| 2.1.10 蛋白质谱分析 | 第21页 |
| 2.2 实验结果 | 第21-28页 |
| 2.2.1 颗粒酶A和颗粒酶K基因的克隆 | 第21-22页 |
| 2.2.2 颗粒酶A和颗粒酶K基因序列分析 | 第22-24页 |
| 2.2.3 颗粒酶A和颗粒酶K融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第24-27页 |
| 2.2.4 WESTERN BLOT分析 | 第27-28页 |
| 2.2.5 蛋白质谱分析 | 第28页 |
| 2.3 讨论 | 第28-30页 |
| 第三章 球虫感染后鸡盲肠扁桃体颗粒酶转录动态分析 | 第30-39页 |
| 3.1 实验材料与方法 | 第30-33页 |
| 3.1.1 虫株 | 第30页 |
| 3.1.2 实验动物 | 第30页 |
| 3.1.3 主要实验试剂 | 第30-31页 |
| 3.1.4 主要实验仪器与设备 | 第31页 |
| 3.1.5 实验设计 | 第31页 |
| 3.1.6 盲肠扁桃体总RNA的提取及CDNA的合成 | 第31-32页 |
| 3.1.7 引物设计 | 第32页 |
| 3.1.8 标准曲线建立 | 第32-33页 |
| 3.1.9 REAL-TIME PCR检测球虫感染后鸡盲肠扁桃体颗粒酶表达水平 | 第33页 |
| 3.1.10 计算球虫感染后不同时期鸡盲肠扁桃体颗粒酶基因的相对转录量 | 第33页 |
| 3.2 实验结果与分析 | 第33-38页 |
| 3.2.1 标准曲线的建立 | 第33-37页 |
| 3.2.2 球虫感染后鸡盲肠扁桃体颗粒酶MRNA表达差异分析 | 第37-38页 |
| 3.3 讨论 | 第38-39页 |
| 第四章 鸡颗粒酶A和颗粒酶K的酶动力学分析 | 第39-48页 |
| 4.1 实验材料与方法 | 第39-41页 |
| 4.1.1 主要实验试剂 | 第39页 |
| 4.1.2 主要实验仪器与设备 | 第39页 |
| 4.1.3 BRADFORD法测定纯化的重组蛋白浓度 | 第39-40页 |
| 4.1.4 酶动力学分析 | 第40页 |
| 4.1.5 酶抑制动力学分析 | 第40-41页 |
| 4.2 实验结果 | 第41-46页 |
| 4.2.1 BSA标准曲线 | 第41-42页 |
| 4.2.2 PNA标准曲线 | 第42页 |
| 4.2.3 重组表达颗粒酶A和颗粒酶K的酶动力学曲线 | 第42-44页 |
| 4.2.4 重组表达颗粒酶A和颗粒酶K的抑制动力学曲线 | 第44-46页 |
| 4.3 讨论 | 第46-48页 |
| 第五章 鸡颗粒溶素的原核表达及生物学特性分析 | 第48-58页 |
| 5.1 实验材料与方法 | 第48-50页 |
| 5.1.1 主要实验试剂与细胞系 | 第48页 |
| 5.1.2 颗粒溶素基因的克隆 | 第48-49页 |
| 5.1.3 蛋白质序列分析 | 第49页 |
| 5.1.4 系统进化分析 | 第49页 |
| 5.1.5 颗粒溶素重组表达质粒的构建 | 第49页 |
| 5.1.6 颗粒溶素融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第49-50页 |
| 5.1.7 WESTERN BLOT分析 | 第50页 |
| 5.1.8 蛋白质谱分析 | 第50页 |
| 5.1.9 重组表达的颗粒溶素活性检测 | 第50页 |
| 5.2 实验结果 | 第50-56页 |
| 5.2.1 颗粒溶素基因的克隆 | 第50-51页 |
| 5.2.2 蛋白质功能区分析 | 第51-53页 |
| 5.2.3 系统进化分析 | 第53-54页 |
| 5.2.4 颗粒溶素融合蛋白的诱导表达和纯化 | 第54页 |
| 5.2.5 WESTERN BLOT分析 | 第54-55页 |
| 5.2.6 蛋白质谱分析 | 第55页 |
| 5.2.7 重组表达的颗粒溶素活性检测 | 第55-56页 |
| 5.3 讨论 | 第56-58页 |
| 第六章 全文结论 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 作者简历 | 第66页 |
