| 摘要 | 第4-6页 |
| Abstract | 第6-7页 |
| 第一章 绪论 | 第11-21页 |
| 1.1 果胶 | 第11-12页 |
| 1.1.1 果胶的定义 | 第12页 |
| 1.1.2 果胶的分类 | 第12页 |
| 1.2 果胶酶 | 第12-18页 |
| 1.2.1 原果胶酶 | 第13页 |
| 1.2.2 果胶酯酶 | 第13-15页 |
| 1.2.3 聚半乳糖醛酸酶 | 第15-16页 |
| 1.2.4 果胶裂解酶 | 第16页 |
| 1.2.5 果胶酸裂解酶 | 第16-18页 |
| 1.3 果胶酶在饲料工业中的运用 | 第18-19页 |
| 1.4 热稳定性酶 | 第19页 |
| 1.5 研究的目的、内容和创新性 | 第19-21页 |
| 1.5.1 研究的目的及内容 | 第19-20页 |
| 1.5.2 创新点 | 第20-21页 |
| 第二章 果胶酶基因的克隆及工程菌的构建 | 第21-32页 |
| 2.1 实验材料 | 第21-23页 |
| 2.1.1 菌种及质粒 | 第21页 |
| 2.1.2 药品及仪器 | 第21页 |
| 2.1.3 培养基的配制 | 第21-23页 |
| 2.1.4 主要试剂配制 | 第23页 |
| 2.2 实验方法 | 第23-28页 |
| 2.2.1 菌种的培养 | 第23页 |
| 2.2.2 果胶酶基因的扩增 | 第23-24页 |
| 2.2.3 目的基因凝胶回收 | 第24-25页 |
| 2.2.4 大肠杆菌JM109感受态细胞制备 | 第25-26页 |
| 2.2.5 JM109-pMD18-pec重组细胞的构建 | 第26-27页 |
| 2.2.6 重组表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 2.3 结果与分析 | 第28-31页 |
| 2.3.1 pec基因的克隆 | 第28页 |
| 2.3.2 pMD18-pec阳性菌的验证及测序 | 第28-30页 |
| 2.3.3 pGEX4T-pec表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.4 小结 | 第31-32页 |
| 第三章 嗜热凝结芽孢杆菌果胶酶基因的序列结构分析 | 第32-38页 |
| 3.1 分析方法 | 第32-33页 |
| 3.1.1 序列分析 | 第32页 |
| 3.1.2 理化性质分析 | 第32页 |
| 3.1.3 蛋白二级结构预测 | 第32-33页 |
| 3.1.4 蛋白三级结构预测 | 第33页 |
| 3.2 分析结果 | 第33-37页 |
| 3.2.1 阅读框分析 | 第33-34页 |
| 3.2.2 序列分析 | 第34页 |
| 3.2.3 理化性质分析 | 第34页 |
| 3.2.4 疏水性分析 | 第34-35页 |
| 3.2.5 跨膜区域 | 第35-36页 |
| 3.2.6 二级结构预测 | 第36页 |
| 3.2.7 三级结构预测 | 第36-37页 |
| 3.3 小结 | 第37-38页 |
| 第四章 重组蛋白的表达及纯化 | 第38-52页 |
| 4.1 实验材料 | 第38-41页 |
| 4.1.1 菌株 | 第38页 |
| 4.1.2 主要试剂 | 第38页 |
| 4.1.3 培养基与溶液 | 第38-41页 |
| 4.1.4 主要仪器 | 第41页 |
| 4.2 实验方法 | 第41-44页 |
| 4.2.1 蛋白表达及条件优化 | 第41-42页 |
| 4.2.2 SDS-PAGE电泳 | 第42-43页 |
| 4.2.3 重组蛋白可溶性验证 | 第43页 |
| 4.2.4 重组蛋白的纯化 | 第43-44页 |
| 4.2.5 蛋白浓度测定 | 第44页 |
| 4.3 实验结果 | 第44-50页 |
| 4.3.1 重组蛋白的诱导表达 | 第44-45页 |
| 4.3.2 表达条件的优化 | 第45-48页 |
| 4.3.3 蛋白可溶性分析 | 第48页 |
| 4.3.4 重组蛋白纯化 | 第48-49页 |
| 4.3.5 蛋白浓度测定 | 第49-50页 |
| 4.4 小结 | 第50-52页 |
| 第五章 嗜热凝结芽孢杆菌果胶酶酶学性质的研究 | 第52-63页 |
| 5.1 实验材料与仪器 | 第52-54页 |
| 5.1.1 菌种与培养基 | 第52页 |
| 5.1.2 药品及仪器 | 第52-54页 |
| 5.1.3 溶液及缓冲液的配制 | 第54页 |
| 5.2 实验方法 | 第54-57页 |
| 5.2.1 果胶酶酶活测定 | 第54-56页 |
| 5.2.2 酶的最适反应温度及热稳定性 | 第56页 |
| 5.2.3 酶的最适反应pH值以及酶的酸碱稳定性 | 第56页 |
| 5.2.4 金属离子及其他化合物对酶活性的影响 | 第56-57页 |
| 5.2.5 不同酯化程度的果胶对酶活性的影响 | 第57页 |
| 5.2.6 模拟胃肠环境对酶活性的影响 | 第57页 |
| 5.3 试验结果 | 第57-61页 |
| 5.3.1 果胶酶的酶活测定 | 第57-58页 |
| 5.3.2 酶的最适反应温度及热稳定性 | 第58-59页 |
| 5.3.3 酶的最适反应pH值以及酶的酸碱稳定性 | 第59-60页 |
| 5.3.4 金属离子及化合物对酶活性的影响 | 第60页 |
| 5.3.5 不同酯化程度的果胶对酶活性的影响 | 第60-61页 |
| 5.3.6 模拟胃肠环境对酶活性的影响 | 第61页 |
| 5.4 小结 | 第61-63页 |
| 第六章 结论与展望 | 第63-64页 |
| 6.1 结论 | 第63页 |
| 6.2 展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 发表论文和参加科研情况说明 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72页 |