| 摘要 | 第7-9页 |
| abstract | 第9-11页 |
| 第一章 引言 | 第12-23页 |
| 1.1 斑马鱼心脏发育简介 | 第12-13页 |
| 1.2 调控心脏发育的转录因子：T-box基因家族简介 | 第13-15页 |
| 1.3 Tbx2、Tbx5、Tbx20基因功能研究进展 | 第15-17页 |
| 1.3.1 Tbx2研究进展 | 第15-16页 |
| 1.3.2 Tbx5研究进展 | 第16页 |
| 1.3.3 Tbx20研究进展 | 第16-17页 |
| 1.4 CRISPR/Cas9系统简介 | 第17-19页 |
| 1.4.1 CRISPR/Cas9系统工作原理 | 第17-19页 |
| 1.4.2 CRISPR/Cas9的研究进展及在模式动物中的应用 | 第19页 |
| 1.5 转录组测序简介 | 第19-23页 |
| 第二章 CRISPR/Cas9介导的斑马鱼tbx2b、tbx5a、tbx20基因突变体的制备 | 第23-36页 |
| 2.1 材料来源 | 第23-24页 |
| 2.1.1 斑马鱼的来源与养殖条件 | 第23页 |
| 2.1.2 实验仪器 | 第23-24页 |
| 2.1.3 实验试剂 | 第24页 |
| 2.2 实验方法 | 第24-32页 |
| 2.2.1 质粒和菌株的来源 | 第24页 |
| 2.2.2 设计gRNA及靶点和引物 | 第24-26页 |
| 2.2.3 gRNA的合成 | 第26-28页 |
| 2.2.4 Cas9 mRNA的合成 | 第28-30页 |
| 2.2.5 显微注射 | 第30页 |
| 2.2.6 T7E1检测敲除效率 | 第30-31页 |
| 2.2.7 单克隆测序分析 | 第31-32页 |
| 2.3 实验结果 | 第32-34页 |
| 2.3.1 合成Cas9 mRNA | 第32页 |
| 2.3.2 合成tbx gRNA | 第32-33页 |
| 2.3.3 T7E1酶切结果显示tbx2b、tbx5a、tbx20基因敲除成功 | 第33-34页 |
| 2.3.4 成功筛选出F1 tbx2b、tbx5a和tbx20杂合子斑马鱼 | 第34页 |
| 2.4 讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 斑马鱼tbx20基因的初步研究 | 第36-46页 |
| 3.1 材料来源 | 第36-37页 |
| 3.1.1 实验仪器 | 第36页 |
| 3.1.2 实验试剂 | 第36-37页 |
| 3.2 实验方法 | 第37-39页 |
| 3.2.1 总RNA的提取 | 第37页 |
| 3.2.2 反转录获得cDNA | 第37-38页 |
| 3.2.3 荧光定量PCR检测下游基因的相对表达量 | 第38-39页 |
| 3.2.4 成像 | 第39页 |
| 3.3 实验结果 | 第39-43页 |
| 3.3.1 CRISPR/Cas9介导的斑马鱼tbx20基因敲除 | 第39-40页 |
| 3.3.2 tbx20突变鱼系形态学观察与拍照 | 第40-43页 |
| 3.3.3 tbx20调控lef1、nppa和has2的表达 | 第43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-46页 |
| 第四章 斑马鱼早期心脏发育过程转录组学分析 | 第46-55页 |
| 4.1 材料来源 | 第46-47页 |
| 4.1.1 斑马鱼的养殖条件与胚胎处理 | 第46页 |
| 4.1.2 实验仪器 | 第46页 |
| 4.1.3 实验试剂 | 第46-47页 |
| 4.2 实验方法 | 第47-48页 |
| 4.2.1 样品的制备 | 第47页 |
| 4.2.2 建库测序流程 | 第47-48页 |
| 4.2.3 成像 | 第48页 |
| 4.3 实验结果 | 第48-53页 |
| 4.3.1 成功分离出斑马鱼4个不同关键发育时期胚胎心脏 | 第48-49页 |
| 4.3.2 测序数据质量情况汇总 | 第49-52页 |
| 4.3.3 参考序列比对分析 | 第52页 |
| 4.3.4 差异表达分析 | 第52-53页 |
| 4.4 讨论 | 第53-55页 |
| 第五章 总结 | 第55-56页 |
| 附录 tbx2b、tbx5a、tbx20成功敲除的三个基因的靶位点区域序列 | 第56-57页 |
| 致谢 | 第57-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
