| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-10页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-19页 |
| 1.1 三型分泌系统 | 第11-14页 |
| 1.1.1 革兰氏阴性菌分泌系统简介 | 第11-12页 |
| 1.1.2 三型分泌系统的组成 | 第12-13页 |
| 1.1.3 沙门氏菌的三型分泌系统 | 第13-14页 |
| 1.1.4 志贺氏菌的三型分泌系统 | 第14页 |
| 1.2 磷酸苏氨酸裂合酶 | 第14-18页 |
| 1.2.1 磷酸苏氨酸裂合酶的发现 | 第15-16页 |
| 1.2.2 磷酸苏氨酸裂合酶的催化机制 | 第16-18页 |
| 1.3 科学问题的提出和本研究的目的意义 | 第18-19页 |
| 第二章 磷酸苏氨酸裂合酶位点特异性抑制剂的设计 | 第19-35页 |
| 2.1 前言 | 第19页 |
| 2.2 材料和方法 | 第19-24页 |
| 2.2.1 材料 | 第19-20页 |
| 2.2.1.1 实验材料 | 第19页 |
| 2.2.1.2 实验试剂 | 第19-20页 |
| 2.2.1.3 实验仪器 | 第20页 |
| 2.2.2 实验方法 | 第20-24页 |
| 2.2.2.1 蛋白质的表达纯化 | 第20-21页 |
| 2.2.2.1.1 蛋白的诱导表达和裂解液上清的制备 | 第20-21页 |
| 2.2.2.1.2 OspF蛋白的纯化 | 第21页 |
| 2.2.2.1.3 SpvC野生型和突变体蛋白的纯化 | 第21页 |
| 2.2.2.2 含脱氢丙氨酸的MAPK多肽的制备 | 第21-22页 |
| 2.2.2.3 酶与多肽的交联反应 | 第22-24页 |
| 2.2.2.3.1 pT-pY-Erk2与OspF共价交联 | 第22页 |
| 2.2.2.3.2 pS/pT-pY-Erk2与SpvC的共价交联 | 第22页 |
| 2.2.2.3.3 pS-pY-P38与SpvC的共价交联 | 第22页 |
| 2.2.2.3.4 △S-pY-Erk2与SpvC的共价交联 | 第22页 |
| 2.2.2.3.5 含脱氢丙氨酸的磷酸化MAPK多肽与SpvC的共价交联 | 第22-23页 |
| 2.2.2.3.6 pH对交联效率的影响 | 第23页 |
| 2.2.2.3.7 质谱鉴定共价交联位点 | 第23页 |
| 2.2.2.3.8 不饱和氨基酸的紫外-可见光谱 | 第23页 |
| 2.2.2.3.9 N-乙酰半胱氨酸与不饱和多肽的反应 | 第23页 |
| 2.2.2.3.10 磷酸苏氨酸裂合酶酶活性测定 | 第23-24页 |
| 2.3 结果与分析 | 第24-33页 |
| 2.3.1 MAPK多肽对酶的共价修饰反应 | 第24-31页 |
| 2.3.1.1 磷酸化多肽与磷酸苏氨酸裂合酶共价交联产物的生成 | 第24-27页 |
| 2.3.1.2 共价交联位点的鉴定 | 第27-28页 |
| 2.3.1.3 赖氨酸侧链氨基的pKa对交联反应的影响 | 第28-31页 |
| 2.3.2 共价交联抑制酶活性 | 第31-33页 |
| 2.4 讨论 | 第33-35页 |
| 第三章 磷酸苏氨酸裂合酶OspF入核的机制 | 第35-47页 |
| 3.1 前言 | 第35-36页 |
| 3.2 材料和方法 | 第36-38页 |
| 3.2.1 材料 | 第36-37页 |
| 3.2.1.1 实验材料 | 第36页 |
| 3.2.1.2 实验试剂 | 第36页 |
| 3.2.1.3 实验仪器 | 第36-37页 |
| 3.2.2 方法 | 第37-38页 |
| 3.2.2.1 质粒的构建 | 第37页 |
| 3.2.2.2 蛋白的纯化立 | 第37页 |
| 3.2.2.3 GST PULL DOWN实验 | 第37页 |
| 3.2.2.4 Shigella 感染实验 | 第37-38页 |
| 3.2.2.5 转染质粒观测蛋白入核实验 | 第38页 |
| 3.3 结果与分析 | 第38-43页 |
| 3.3.1 OspF/SpvC入核情况 | 第38-39页 |
| 3.3.2 OspF入核不依赖于与Erk的结合 | 第39-40页 |
| 3.3.3 OspF核定位序列的鉴定 | 第40-42页 |
| 3.3.4 OspF的核定位序列通过与Kap 1结合而入核 | 第42-43页 |
| 3.4 讨论 | 第43-47页 |
| 结论 | 第47-49页 |
| 参考文献 | 第49-51页 |
| 致谢 | 第51-53页 |
| 在读期间所发表的论文 | 第53页 |
| 在读期间参加科研情况 | 第53页 |
