| 摘要 | 第3-4页 |
| Abstract | 第4-5页 |
| 外文缩略词表 | 第10-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-21页 |
| 第一章 小反刍兽疫研究进展 | 第12-21页 |
| 1 病原学研究进展 | 第12-15页 |
| 1.1 病毒形态特征 | 第12-13页 |
| 1.2 病毒理化特征 | 第13页 |
| 1.3 病毒分子生物学特征 | 第13-15页 |
| 1.3.1 核衣壳蛋白 | 第13-14页 |
| 1.3.2 磷蛋白 | 第14页 |
| 1.3.3 基质蛋白 | 第14页 |
| 1.3.4 融合蛋白 | 第14页 |
| 1.3.5 血凝素蛋白 | 第14页 |
| 1.3.6 大蛋白 | 第14-15页 |
| 2 流行病学 | 第15页 |
| 2.1 易感动物 | 第15页 |
| 2.2 地理分布 | 第15页 |
| 2.3 传播途径 | 第15页 |
| 3 发病机理 | 第15页 |
| 4 病理变化 | 第15-16页 |
| 5 临床症状 | 第16页 |
| 6 诊断方法研究进展 | 第16-19页 |
| 6.1 初步诊断 | 第16页 |
| 6.2 实验室诊断 | 第16-19页 |
| 6.2.1 样品采集 | 第16-17页 |
| 6.2.2 病毒的分离 | 第17页 |
| 6.2.3 病毒抗原的检测 | 第17-18页 |
| 6.2.4 病毒核酸的检测 | 第18页 |
| 6.2.5 血清学检测 | 第18-19页 |
| 7 PPR的预防 | 第19-20页 |
| 8 PPR的消灭 | 第20页 |
| 9 本研究的目的意义 | 第20-21页 |
| 第二部分 试验研究 | 第21-51页 |
| 第二章 小反刍兽疫病毒甘肃分离株F基因的克隆及相关生物信息学分析 | 第21-32页 |
| 1 材料 | 第21-23页 |
| 1.1 病料 | 第21页 |
| 1.2 菌种、载体 | 第21页 |
| 1.3 仪器 | 第21页 |
| 1.4 试剂 | 第21-23页 |
| 1.4.1 主要试剂 | 第21-22页 |
| 1.4.2 试剂配制 | 第22页 |
| 1.4.3 培养基配制 | 第22-23页 |
| 2 方法 | 第23-25页 |
| 2.1 引物设计 | 第23页 |
| 2.2 PPRV总RNA的提取 | 第23页 |
| 2.3 RT-PCR扩增F基因 | 第23-24页 |
| 2.4 RT-PCR产物纯化回收 | 第24页 |
| 2.5 回收产物的连接转化 | 第24页 |
| 2.6 F基因序列及其编码蛋白序列的生物信息学分析 | 第24-25页 |
| 2.7 遗传进化分析 | 第25页 |
| 3 结果 | 第25-29页 |
| 3.1 F基因的PCR扩增产物鉴定 | 第25-27页 |
| 3.2 F基因编码蛋白序列的生物信息学分析 | 第27-29页 |
| 3.2.1 信号肽及跨膜区的预测 | 第27-28页 |
| 3.2.2 F蛋白二级结构预测 | 第28页 |
| 3.2.3 抗原位点预测 | 第28-29页 |
| 3.3 F基因遗传进化分析 | 第29页 |
| 4 讨论 | 第29-32页 |
| 第三章 小反刍兽疫病毒甘肃分离株F基因的原核表达及表达产物免疫原性分析 | 第32-42页 |
| 1 材料 | 第32-33页 |
| 1.1 实验动物 | 第32页 |
| 1.2 菌种、载体及实验动物 | 第32页 |
| 1.3 仪器 | 第32页 |
| 1.4 试剂 | 第32-33页 |
| 1.4.1 主要试剂 | 第32页 |
| 1.4.2 试剂配制 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-37页 |
| 2.1 引物设计 | 第33-34页 |
| 2.2 原核表达载体的构建 | 第34页 |
| 2.3 融合蛋白的诱导表达 | 第34-35页 |
| 2.3.1 原核表达形式的确定 | 第35页 |
| 2.3.2 原核表达条件的优化 | 第35页 |
| 2.4 表达产物的纯化 | 第35-36页 |
| 2.5 表达产物的复性 | 第36页 |
| 2.6 表达产物的Western-blot检测 | 第36页 |
| 2.7 动物免疫及多抗制备 | 第36-37页 |
| 2.7.1 动物免疫 | 第36页 |
| 2.7.2 多克隆抗体效价的检测 | 第36-37页 |
| 2.7.3 多克隆抗体的Western-blot检测 | 第37页 |
| 3 结果 | 第37-40页 |
| 3.1 Fa片段的扩增结果 | 第37页 |
| 3.2 原核表达质粒的构建 | 第37-38页 |
| 3.3 融合蛋白的诱导表达及SDS-PAGE分析 | 第38页 |
| 3.4 表达产物的Western-blot分析 | 第38-39页 |
| 3.5 多克隆抗体的鉴定 | 第39-40页 |
| 3.5.1 效价 | 第39页 |
| 3.5.2 Western-blot鉴定 | 第39-40页 |
| 4 讨论 | 第40-42页 |
| 第四章 小反刍兽疫病毒甘肃株F蛋白单克隆抗体的制备 | 第42-51页 |
| 1 材料 | 第42-43页 |
| 1.1 实验动物 | 第42页 |
| 1.2 抗原、细胞 | 第42页 |
| 1.3 仪器 | 第42页 |
| 1.4 试剂 | 第42-43页 |
| 1.4.1 主要试剂 | 第42页 |
| 1.4.2 试剂配制 | 第42-43页 |
| 2 方法 | 第43-46页 |
| 2.1 最佳抗原包被量确定 | 第43页 |
| 2.2 BALB/c小鼠的免疫 | 第43页 |
| 2.3 骨髓瘤细胞的培养 | 第43页 |
| 2.4 饲养细胞的制备 | 第43-44页 |
| 2.5 小鼠免疫脾细胞的制备 | 第44页 |
| 2.6 细胞融合 | 第44-45页 |
| 2.7 杂交瘤细胞筛选 | 第45页 |
| 2.8 亚克隆筛选 | 第45页 |
| 2.9 杂交瘤细胞的冻存与复苏 | 第45页 |
| 2.10 大量制备单克隆抗体 | 第45-46页 |
| 2.11 单克隆抗体生物学特性的鉴定 | 第46页 |
| 2.11.1 杂交瘤细胞分泌抗体稳定性的检测[96] | 第46页 |
| 2.11.2 单克隆抗体效价的测定 | 第46页 |
| 2.11.3 单克隆抗体对热稳定性试验 | 第46页 |
| 2.11.4 单克隆抗体Ig类/亚类/亚型的鉴别 | 第46页 |
| 2.11.5 单克隆抗体Western-blot检测 | 第46页 |
| 3 结果 | 第46-49页 |
| 3.1 抗原最佳包被浓度的筛选 | 第46-47页 |
| 3.2 小鼠尾血效价检测 | 第47页 |
| 3.3 杂交瘤细胞株的建立 | 第47页 |
| 3.4 单克隆抗体生物学特性鉴定结果 | 第47-49页 |
| 3.4.1 杂交瘤细胞抗体分泌稳定性的检测 | 第47-48页 |
| 3.4.2 单克隆抗体效价测定 | 第48页 |
| 3.4.3 单克隆抗体的热稳定性试验 | 第48页 |
| 3.4.4 单克隆抗体亚型测定 | 第48页 |
| 3.4.5 单克隆抗体的Western-blot检测 | 第48-49页 |
| 4 讨论 | 第49-51页 |
| 全文结论 | 第51-52页 |
| 参考文献 | 第52-59页 |
| 致谢 | 第59-60页 |
| 作者简介 | 第60-61页 |
| 导师简介 | 第61-63页 |
| 导师简介1 | 第61-62页 |
| 导师简介2 | 第62-63页 |
