| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-6页 |
| 1 引言 | 第14-24页 |
| 1.1 TCDCA的研究概况 | 第14-16页 |
| 1.1.1 TCDCA的理化性质 | 第14-15页 |
| 1.1.2 TCDCA的药理学研究概况 | 第15-16页 |
| 1.2 大鼠肺泡巨噬细胞NR8383细胞系的研究概况 | 第16-17页 |
| 1.3 TGR5受体的研究概况 | 第17-20页 |
| 1.3.1 TGR5概述 | 第17-18页 |
| 1.3.2 TGR5受体的生理功能 | 第18-20页 |
| 1.4 cAMP的研究概况 | 第20-23页 |
| 1.4.1 cAMP的合成与代谢 | 第20-22页 |
| 1.4.2 cAMP检测方法 | 第22-23页 |
| 1.5 本研究的目的及意义 | 第23-24页 |
| 2 NR8383细胞TGR5基因阻断模型建立的研究 | 第24-34页 |
| 2.1 试验材料 | 第24页 |
| 2.1.1 细胞株 | 第24页 |
| 2.1.2 药品试剂 | 第24页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第24页 |
| 2.2 数据处理和统计学分析 | 第24页 |
| 2.3 研究内容和方法 | 第24-29页 |
| 2.3.1 大鼠肺泡巨噬细胞的培养 | 第24-25页 |
| 2.3.2 siRNA转染NR838细胞 | 第25页 |
| 2.3.3 实时荧光定量PCR法检测TGR5 mRNA表达 | 第25-26页 |
| 2.3.4 Western Blotting检测TGR5蛋白表达 | 第26-29页 |
| 2.4 结果 | 第29-32页 |
| 2.4.1 总RNA琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| 2.4.2 荧光标记的siRNA转染NR8383细胞的效率 | 第29-30页 |
| 2.4.3 溶解曲线分析和扩增产物琼脂糖凝胶电泳结果 | 第30-31页 |
| 2.4.4 TGR5 mRNA表达量的变化 | 第31页 |
| 2.4.5 TGR5蛋白表达的变化 | 第31-32页 |
| 2.5 讨论 | 第32-33页 |
| 2.6 小结 | 第33-34页 |
| 3 稳定表达TGR5受体NR8383细胞系的建立 | 第34-42页 |
| 3.1 试验材料 | 第34页 |
| 3.1.1 细胞株 | 第34页 |
| 3.1.2 药品试剂 | 第34页 |
| 3.1.3 主要仪器设备 | 第34页 |
| 3.2 数据处理和统计学分析 | 第34-35页 |
| 3.3 研究内容和方法 | 第35-36页 |
| 3.3.1 NR8383细胞的G418最小致死浓度的测定 | 第35页 |
| 3.3.2 G418筛选并扩增阳性克隆 | 第35页 |
| 3.3.3 稳定表达TGR5 NR8383细胞系的鉴定 | 第35-36页 |
| 3.4 结果 | 第36-40页 |
| 3.4.1 总RNA琼脂糖凝胶电泳 | 第36-37页 |
| 3.4.2 溶解曲线分析和扩增效率曲线结果 | 第37-38页 |
| 3.4.3 TGR5 m RNA表达量的变化 | 第38页 |
| 3.4.4 TGR5蛋白表达的变化 | 第38-39页 |
| 3.4.5 免疫荧光结果 | 第39-40页 |
| 3.5 讨论 | 第40-41页 |
| 3.6 小结 | 第41-42页 |
| 4 TCDCA对TGR5受体基因沉默及稳定表达的NR8383细胞中cAMP含量的影响 | 第42-52页 |
| 4.1 试验材料 | 第42页 |
| 4.1.1 细胞株 | 第42页 |
| 4.1.2 药品试剂 | 第42页 |
| 4.1.3 主要仪器设备 | 第42页 |
| 4.2 数据处理和统计学分析 | 第42页 |
| 4.3 研究内容和方法 | 第42-46页 |
| 4.3.1 细胞培养 | 第42页 |
| 4.3.2 TCDCA对NR8383细胞增殖-毒性作用的药效曲线 | 第42-43页 |
| 4.3.3 TCDCA对TGR5基因沉默的NR8383细胞中cAMP含量的影响 | 第43-45页 |
| 4.3.4 TCDCA对稳定表达TGR5受体的NR8383细胞中cAMP含量的影响 | 第45-46页 |
| 4.4 结果 | 第46-50页 |
| 4.4.1 TCDCA对NR8383细胞增殖-毒性作用的量反应曲线 | 第46页 |
| 4.4.2 cAMP标准曲线 | 第46-47页 |
| 4.4.3 BCA蛋白浓度测定标准曲线 | 第47-48页 |
| 4.4.4 TCDCA对TGR5基因沉默后cAMP含量的影响 | 第48-49页 |
| 4.4.5 TCDCA对稳定表达TGR5受体的NR8383细胞中cAMP含量的影响 | 第49-50页 |
| 4.5 讨论 | 第50-51页 |
| 4.6 小结 | 第51-52页 |
| 5 TCDCA对AC阻断后NR8383-TGR5细胞中cAMP含量的影响 | 第52-56页 |
| 5.1 试验材料 | 第52页 |
| 5.1.1 细胞株 | 第52页 |
| 5.1.2 药品试剂 | 第52页 |
| 5.1.3 主要仪器设备 | 第52页 |
| 5.2 数据处理和统计学分析 | 第52页 |
| 5.3 研究内容和方法 | 第52-53页 |
| 5.3.1 TCDCA对AC阻断后NR8383-TGR5细胞中cAMP含量的影响 | 第52-53页 |
| 5.4 结果 | 第53-55页 |
| 5.5 讨论 | 第55页 |
| 5.6 小结 | 第55-56页 |
| 6 TCDCA对PDE4阻断后NR8383-TGR5细胞中cAMP含量的影响 | 第56-61页 |
| 6.1 试验材料 | 第56页 |
| 6.1.1 细胞株 | 第56页 |
| 6.1.2 药品试剂 | 第56页 |
| 6.1.3 主要仪器设备 | 第56页 |
| 6.2 数据处理和统计学分析 | 第56页 |
| 6.3 研究内容和方法 | 第56-57页 |
| 6.3.1 TCDCA对PDE4阻断后NR8383-TGR5细胞中cAMP含量的影响 | 第56-57页 |
| 6.4 结果 | 第57-59页 |
| 6.5 讨论 | 第59-60页 |
| 6.6 小结 | 第60-61页 |
| 全文讨论 | 第61-62页 |
| 全文结论 | 第62页 |
| 本课题主要创新之处 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 作者简介 | 第71-72页 |
