| 摘要 | 第5-7页 |
| abstract | 第7-8页 |
| 第一章 引言 | 第14-28页 |
| 1.1 猪繁殖与呼吸综合征简介 | 第14页 |
| 1.2 PRRS病原学研究 | 第14-21页 |
| 1.2.1 PRRSV基因组结构 | 第15-16页 |
| 1.2.2 PRRSV蛋白与功能 | 第16-20页 |
| 1.2.3 PRRSV基因组转录与复制机制 | 第20-21页 |
| 1.3 PRRSV特点 | 第21-23页 |
| 1.3.1 高变异性 | 第21页 |
| 1.3.2 免疫抑制作用 | 第21-22页 |
| 1.3.3 抗体依赖增强作用（ADE） | 第22-23页 |
| 1.4 磷酸化修饰与病毒复制 | 第23-24页 |
| 1.5 病毒N蛋白相互作用研究 | 第24-25页 |
| 1.6 DEAD-BOX RNA解旋酶与病毒复制 | 第25-27页 |
| 1.7 本研究目的与意义 | 第27-28页 |
| 第二章 PRRSV N蛋白多抗的制备及磷酸化位点的鉴定 | 第28-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-29页 |
| 2.1.1 细胞与病毒 | 第28页 |
| 2.1.2 质粒和菌种 | 第28-29页 |
| 2.1.3 抗体和试剂 | 第29页 |
| 2.1.4 主要仪器 | 第29页 |
| 2.2 实验方法 | 第29-37页 |
| 2.2.1 N蛋白原核表达载体的构建 | 第29-30页 |
| 2.2.2 N蛋白真核表达载体的构建 | 第30-33页 |
| 2.2.3 N蛋白原核表达及鉴定 | 第33-35页 |
| 2.2.4 N蛋白真核表达及鉴定 | 第35-36页 |
| 2.2.5 PRRSV N蛋白磷酸化形式的鉴定 | 第36-37页 |
| 2.3 实验结果 | 第37-44页 |
| 2.3.1 PRRSV N蛋白原核表达载体的构建 | 第37页 |
| 2.3.2 N蛋白原核表达鉴定 | 第37-38页 |
| 2.3.3 原核表达蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| 2.3.4 多克隆抗体特异性检测 | 第39-40页 |
| 2.3.5 PRRSV N蛋白磷酸化形式鉴定 | 第40-41页 |
| 2.3.6 PRRSV N蛋白磷酸化形式的分离 | 第41-42页 |
| 2.3.7 N蛋白磷酸化位点软件预测分析 | 第42-43页 |
| 2.3.8 N蛋白磷酸化位点鉴定 | 第43-44页 |
| 2.4 讨论 | 第44-47页 |
| 第三章 PRRSV N蛋白磷酸化在病毒复制中的作用研究 | 第47-61页 |
| 3.1 实验材料 | 第47-48页 |
| 3.1.1 病毒与细胞 | 第47页 |
| 3.1.2 感染性cDNA克隆 | 第47页 |
| 3.1.3 主要试剂和抗体 | 第47-48页 |
| 3.1.4 主要仪器 | 第48页 |
| 3.2 实验方法 | 第48-52页 |
| 3.2.1 N蛋白磷酸化位点突变载体的构建 | 第48-49页 |
| 3.2.2 病毒的拯救 | 第49-50页 |
| 3.2.3 拯救病毒的鉴定 | 第50-51页 |
| 3.2.4 突变病毒生物学特征分析 | 第51页 |
| 3.2.5 荧光定量PCR检测病毒RNA转录水平 | 第51-52页 |
| 3.3 实验结果 | 第52-58页 |
| 3.3.1 N蛋白磷酸化位点突变载体pmHuN4的构建 | 第52-54页 |
| 3.3.2 拯救病毒的鉴定 | 第54-55页 |
| 3.3.3 拯救病毒N蛋白磷酸化检测 | 第55-56页 |
| 3.3.4 N蛋白磷酸化对病毒复制的影响 | 第56-58页 |
| 3.4 讨论 | 第58-61页 |
| 第四章 PRRSV N蛋白与宿主细胞DDX5蛋白相互作用研究 | 第61-80页 |
| 4.1 材料 | 第61页 |
| 4.1.1 细胞与病毒 | 第61页 |
| 4.1.2 抗体与试剂 | 第61页 |
| 4.1.3 主要仪器 | 第61页 |
| 4.2 实验方法 | 第61-66页 |
| 4.2.1 DDX5真核表达载体的构建 | 第61-62页 |
| 4.2.2 免疫共沉淀（Co-IP） | 第62-63页 |
| 4.2.3 蛋白样品的处理 | 第63页 |
| 4.2.4 激光共聚焦实验 | 第63页 |
| 4.2.5 pCAGGS-EGFP-N和pCMV-N-mCherry-DDX5载体的构建 | 第63-65页 |
| 4.2.6 DDX5 siRNA干扰 | 第65页 |
| 4.2.7 siRNA细胞毒性实验 | 第65-66页 |
| 4.2.8 DDX5蛋白对病毒增殖的影响 | 第66页 |
| 4.2.9 DDX5蛋白作用研究 | 第66页 |
| 4.3 实验结果 | 第66-78页 |
| 4.3.1 DDX5及其各结构域的扩增 | 第66-68页 |
| 4.3.2 DDX5真核表达载体蛋白的表达 | 第68页 |
| 4.3.3 体外真核表达N蛋白与DDX5相互作用 | 第68-69页 |
| 4.3.4 PRRSV N蛋白与DDX5相互作用 | 第69-70页 |
| 4.3.5 EGFP- N与mCherry-DDX5融合表达载体的构建及检测 | 第70-72页 |
| 4.3.6 PRRSV N与DDX5亚细胞定位检测 | 第72-73页 |
| 4.3.7 宿主细胞DDX5对病毒复制的影响 | 第73-78页 |
| 4.4 讨论 | 第78-80页 |
| 第五章 全文结论 | 第80-81页 |
| 参考文献 | 第81-91页 |
| 附录 | 第91-94页 |
| 致谢 | 第94-95页 |
| 作者简介 | 第95页 |
