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CpG ODNs介导的水产养殖甲壳动物免疫抑制与促生长机理的初步研究

摘要第3-5页
Abstract第5-6页
第一章 绪论第10-26页
    1.1 免疫增强剂对水产养殖动物的免疫效果研究第10-13页
        1.1.1 免疫增强剂的种类及其免疫激活效应第10-12页
        1.1.2 免疫增强剂的免疫抑制效应第12页
        1.1.3 免疫增强剂对水产养殖动物的促生长作用第12-13页
    1.2 免疫增强剂CpG ODNs的研究概况第13-14页
        1.2.1 CpG ODNs的发现第13页
        1.2.2 CpG ODNs的结构特征第13-14页
    1.3 CpG ODNs在高等动物中的作用机制与应用研究第14-17页
        1.3.1 CpG ODNs在脊椎动物中的免疫激活效应及其作用机制第14-15页
        1.3.2 CpG ODNs在脊椎动物中的应用和安全第15-17页
    1.4 CpG ODNs在水产养殖动物中的免疫激活效应第17-24页
        1.4.1 CpG ODNs在水产养殖鱼类中的免疫激活效应及其应用第17-18页
        1.4.2 CpG ODNs在水产养殖甲壳动物中的应用第18-24页
    1.5 本研究的目的和意义第24-26页
第二章 实验材料和方法第26-46页
    2.1 实验材料第26-32页
        2.1.1 实验动物、菌株第26页
        2.1.2 CpG ODNs的合成和鉴定第26-27页
        2.1.3 实验用基础饲料的原料第27-28页
        2.1.4 主要化学试剂第28-29页
        2.1.5 实验用仪器设备第29-30页
        2.1.6 实验用引物第30-32页
    2.2 实验方法第32-46页
        2.2.1 实验用CpG ODNs的大规模提取第32页
        2.2.2 CpG ODNs添加饲料的制备第32-33页
        2.2.3 实验用虾蟹组织的cDNA模板的制备第33-34页
        2.2.4 基于SYBR Green的real-time PCR技术第34页
        2.2.5 组织石蜡切片的制作和HE染色第34-36页
        2.2.6 组织的扫描电镜观察第36-37页
        2.2.7 酶联免疫(ELISA)实验第37页
        2.2.8 基于FITC荧光法测定血细胞的吞噬活性第37-38页
        2.2.9 血细胞ROS水平的检测第38页
        2.2.10 碱性磷酸酶检测第38-39页
        2.2.11 Ca~(2+)检测第39-40页
        2.2.12 葡萄糖检测第40-41页
        2.2.13 糖原的检测第41-42页
        2.2.14 淀粉酶检测第42-43页
        2.2.15 胃蛋白酶检测第43-45页
        2.2.16 表面等离子体共振(SPR)分析第45-46页
第三章 实验结果第46-66页
    3.1 不同CpG ODNs投喂方式对中华绒螯蟹免疫指标的影响第46-52页
        3.1.1 建立三种不同的CpG ODNs投喂方式第46页
        3.1.2 TLR通路相关受体EsToll1和EsToll2基因的mRNA表达变化第46-47页
        3.1.3 TLR通路相关接头分子EsMyD88基因的mRNA表达变化第47-48页
        3.1.4 LPS诱导的TNF转录因子Es LITAF的m RNA表达变化第48-49页
        3.1.5 血浆中肿瘤坏死因子TNF-α 的变化第49-50页
        3.1.6 血细胞吞噬能力的变化第50-51页
        3.1.7 血细胞中ROS水平的变化第51-52页
    3.2 CpG ODNs介导的中华绒螯蟹促生长机制的研究第52-62页
        3.2.1 CpG ODNs添加饲料投喂方式第52-53页
        3.2.2 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹生长速率的统计第53-54页
        3.2.3 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹血浆中蜕皮激素水平的变化第54-55页
        3.2.4 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹体内糖代谢水平的变化第55-57页
        3.2.5 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹肝胰腺中消化酶水平的变化第57-60页
        3.2.6 壳形成相关指标的检测第60-61页
        3.2.7 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹肠道组织病理切片观察第61-62页
        3.2.8 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹肠道扫描电镜观察第62页
    3.3 不同类型的CpG ODNs对凡纳滨对虾免疫激活能力的探究第62-66页
        3.3.1 LvToll1-3 与CpG ODN-A、B、C、P体外结合能力检测第62-64页
        3.3.2 对虾体内注射四种CpG ODNs后LvToll1-3 的mRNA表达第64-66页
第四章 分析与讨论第66-74页
    4.1 持续CpG ODNs刺激抑制中华绒螯蟹TLR信号通路中相关基因表达降低其免疫效应第66-69页
    4.2 CpG ODNs添加饲料可以促进中华绒鳌蟹蜕皮激素分泌、调节体内能量代谢水平促进其生长第69-72页
    4.3 A型CpG ODNs较其它类型CpG ODNs具有更强的免疫识别能力第72-74页
第五章 结论第74-76页
参考文献第76-87页
致谢第87-89页
附录A 硕士期间发表的论文第89页

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