摘要 | 第3-5页 |
Abstract | 第5-6页 |
第一章 绪论 | 第10-26页 |
1.1 免疫增强剂对水产养殖动物的免疫效果研究 | 第10-13页 |
1.1.1 免疫增强剂的种类及其免疫激活效应 | 第10-12页 |
1.1.2 免疫增强剂的免疫抑制效应 | 第12页 |
1.1.3 免疫增强剂对水产养殖动物的促生长作用 | 第12-13页 |
1.2 免疫增强剂CpG ODNs的研究概况 | 第13-14页 |
1.2.1 CpG ODNs的发现 | 第13页 |
1.2.2 CpG ODNs的结构特征 | 第13-14页 |
1.3 CpG ODNs在高等动物中的作用机制与应用研究 | 第14-17页 |
1.3.1 CpG ODNs在脊椎动物中的免疫激活效应及其作用机制 | 第14-15页 |
1.3.2 CpG ODNs在脊椎动物中的应用和安全 | 第15-17页 |
1.4 CpG ODNs在水产养殖动物中的免疫激活效应 | 第17-24页 |
1.4.1 CpG ODNs在水产养殖鱼类中的免疫激活效应及其应用 | 第17-18页 |
1.4.2 CpG ODNs在水产养殖甲壳动物中的应用 | 第18-24页 |
1.5 本研究的目的和意义 | 第24-26页 |
第二章 实验材料和方法 | 第26-46页 |
2.1 实验材料 | 第26-32页 |
2.1.1 实验动物、菌株 | 第26页 |
2.1.2 CpG ODNs的合成和鉴定 | 第26-27页 |
2.1.3 实验用基础饲料的原料 | 第27-28页 |
2.1.4 主要化学试剂 | 第28-29页 |
2.1.5 实验用仪器设备 | 第29-30页 |
2.1.6 实验用引物 | 第30-32页 |
2.2 实验方法 | 第32-46页 |
2.2.1 实验用CpG ODNs的大规模提取 | 第32页 |
2.2.2 CpG ODNs添加饲料的制备 | 第32-33页 |
2.2.3 实验用虾蟹组织的cDNA模板的制备 | 第33-34页 |
2.2.4 基于SYBR Green的real-time PCR技术 | 第34页 |
2.2.5 组织石蜡切片的制作和HE染色 | 第34-36页 |
2.2.6 组织的扫描电镜观察 | 第36-37页 |
2.2.7 酶联免疫(ELISA)实验 | 第37页 |
2.2.8 基于FITC荧光法测定血细胞的吞噬活性 | 第37-38页 |
2.2.9 血细胞ROS水平的检测 | 第38页 |
2.2.10 碱性磷酸酶检测 | 第38-39页 |
2.2.11 Ca~(2+)检测 | 第39-40页 |
2.2.12 葡萄糖检测 | 第40-41页 |
2.2.13 糖原的检测 | 第41-42页 |
2.2.14 淀粉酶检测 | 第42-43页 |
2.2.15 胃蛋白酶检测 | 第43-45页 |
2.2.16 表面等离子体共振(SPR)分析 | 第45-46页 |
第三章 实验结果 | 第46-66页 |
3.1 不同CpG ODNs投喂方式对中华绒螯蟹免疫指标的影响 | 第46-52页 |
3.1.1 建立三种不同的CpG ODNs投喂方式 | 第46页 |
3.1.2 TLR通路相关受体EsToll1和EsToll2基因的mRNA表达变化 | 第46-47页 |
3.1.3 TLR通路相关接头分子EsMyD88基因的mRNA表达变化 | 第47-48页 |
3.1.4 LPS诱导的TNF转录因子Es LITAF的m RNA表达变化 | 第48-49页 |
3.1.5 血浆中肿瘤坏死因子TNF-α 的变化 | 第49-50页 |
3.1.6 血细胞吞噬能力的变化 | 第50-51页 |
3.1.7 血细胞中ROS水平的变化 | 第51-52页 |
3.2 CpG ODNs介导的中华绒螯蟹促生长机制的研究 | 第52-62页 |
3.2.1 CpG ODNs添加饲料投喂方式 | 第52-53页 |
3.2.2 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹生长速率的统计 | 第53-54页 |
3.2.3 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹血浆中蜕皮激素水平的变化 | 第54-55页 |
3.2.4 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹体内糖代谢水平的变化 | 第55-57页 |
3.2.5 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹肝胰腺中消化酶水平的变化 | 第57-60页 |
3.2.6 壳形成相关指标的检测 | 第60-61页 |
3.2.7 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹肠道组织病理切片观察 | 第61-62页 |
3.2.8 CpG ODNs投喂后中华绒螯蟹肠道扫描电镜观察 | 第62页 |
3.3 不同类型的CpG ODNs对凡纳滨对虾免疫激活能力的探究 | 第62-66页 |
3.3.1 LvToll1-3 与CpG ODN-A、B、C、P体外结合能力检测 | 第62-64页 |
3.3.2 对虾体内注射四种CpG ODNs后LvToll1-3 的mRNA表达 | 第64-66页 |
第四章 分析与讨论 | 第66-74页 |
4.1 持续CpG ODNs刺激抑制中华绒螯蟹TLR信号通路中相关基因表达降低其免疫效应 | 第66-69页 |
4.2 CpG ODNs添加饲料可以促进中华绒鳌蟹蜕皮激素分泌、调节体内能量代谢水平促进其生长 | 第69-72页 |
4.3 A型CpG ODNs较其它类型CpG ODNs具有更强的免疫识别能力 | 第72-74页 |
第五章 结论 | 第74-76页 |
参考文献 | 第76-87页 |
致谢 | 第87-89页 |
附录A 硕士期间发表的论文 | 第89页 |