| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略词表（Abbreviation） | 第7-11页 |
| 文献综述 | 第11-18页 |
| 1 引言 | 第18-19页 |
| 2 材料方法 | 第19-27页 |
| 2.1 试验材料 | 第19-20页 |
| 2.1.1 试验动物 | 第19页 |
| 2.1.2 主要试剂 | 第19页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第19-20页 |
| 2.1.4 数据分析软件及网站 | 第20页 |
| 2.1.5 溶液配制 | 第20页 |
| 2.1.6 菌株与载体 | 第20页 |
| 2.2 牛血液DNA的提取及检测 | 第20-21页 |
| 2.2.1 牛血液基因组DNA的提取 | 第20-21页 |
| 2.2.2 DNA浓度及纯度的检测 | 第21页 |
| 2.3 牛血液白细胞总RNA提取及检测 | 第21页 |
| 2.3.1 牛血液白细胞RNA的提取 | 第21页 |
| 2.3.2 RNA浓度及纯度的检测 | 第21页 |
| 2.4 牛血液白细胞GPR54基因表达量测定 | 第21-22页 |
| 2.4.1 总RNA反转录合成cDNA第一链 | 第21页 |
| 2.4.2 定量引物设计 | 第21-22页 |
| 2.4.3 实时荧光定量PCR反应体系及反应程序 | 第22页 |
| 2.5 启动子区扩增与SNP检测 | 第22-23页 |
| 2.5.1 启动子区扩增引物设计 | 第22页 |
| 2.5.2 WXG-2 引物最佳反应体系及反应程序 | 第22-23页 |
| 2.6 启动子双荧光素酶报告基因分析 | 第23-25页 |
| 2.6.1.目的基因的获取 | 第23页 |
| 2.6.2 PCR产物纯化 | 第23页 |
| 2.6.3 双酶切反应 | 第23-24页 |
| 2.6.4 双酶切产物的纯化 | 第24页 |
| 2.6.5 双酶切产物的连接 | 第24页 |
| 2.6.6 转化 | 第24页 |
| 2.6.7 阳性克隆子的扩大培养及重组质粒的提取 | 第24页 |
| 2.6.8 重组质粒的鉴定 | 第24-25页 |
| 2.7 重组质粒转染细胞及双荧光素酶检测 | 第25-26页 |
| 2.7.1 293T细胞的培养与传代 | 第25页 |
| 2.7.2 细胞转染 | 第25页 |
| 2.7.3 双荧光素酶检测 | 第25-26页 |
| 2.8 数据分析 | 第26-27页 |
| 3 结果分析 | 第27-34页 |
| 3.1 血液DNA和RNA提取效果 | 第27-28页 |
| 3.1.1 DNA提取效果 | 第27页 |
| 3.1.2 牛血液白细胞总RNA提取效果 | 第27-28页 |
| 3.2 不同类型牛GPR54基因启动子结构比较 | 第28-30页 |
| 3.2.1 启动子序列比较 | 第28页 |
| 3.2.2 启动子转录因子结合位点比较 | 第28-30页 |
| 3.3 不同类型牛GPR54基因启动子作用效率比较 | 第30-31页 |
| 3.3.1 特异SNP位点的作用效率 | 第30-31页 |
| 3.3.2 不同类型牛GPR54基因启动子作用效率 | 第31页 |
| 3.4 不同类型牛白细胞GPR54基因表达水平比较 | 第31-34页 |
| 3.4.1 不同类型牛白细胞GPR54基因表达水平比较 | 第31-32页 |
| 3.4.2 年龄和性别间牛GPR54基因表达水平的比较 | 第32-34页 |
| 4.讨 论 | 第34-36页 |
| 4.1 遗传因素在牛早熟性中的主导作用 | 第34页 |
| 4.2 牛的早熟性与GPR54基因的多样性有关 | 第34-35页 |
| 4.3 转录因子对基因调控的影响 | 第35-36页 |
| 5 结论 | 第36-37页 |
| 参考文献 | 第37-44页 |
| 致谢 | 第44-45页 |
| 作者简介 | 第45页 |
