| 摘要 | 第12-14页 |
| ABSTRACT | 第14-16页 |
| 缩略词 | 第17-19页 |
| 第1章 绪论 | 第19-32页 |
| 1.1 海藻多糖 | 第19-23页 |
| 1.1.1 海藻多糖的来源与结构 | 第19-21页 |
| 1.1.2 海藻多糖的理化性质 | 第21页 |
| 1.1.3 海藻多糖的生物活性 | 第21-22页 |
| 1.1.4 海藻多糖的应用 | 第22-23页 |
| 1.2 海藻多糖降解酶 | 第23-26页 |
| 1.2.1 琼胶酶 | 第23-24页 |
| 1.2.2 卡拉胶酶 | 第24-25页 |
| 1.2.3 褐藻胶裂解酶 | 第25-26页 |
| 1.3 褐藻胶裂解酶的研究现状 | 第26-31页 |
| 1.3.1 褐藻胶裂解酶的催化机制 | 第26-27页 |
| 1.3.2 褐藻胶裂解酶的分类 | 第27-28页 |
| 1.3.3 褐藻酸裂解酶的酶学性质 | 第28页 |
| 1.3.4 褐藻酸裂解酶的序列和结构分析 | 第28-30页 |
| 1.3.5 褐藻胶裂解酶中Lid-loop结构对于底物结合的识别机制 | 第30-31页 |
| 1.4 立题依据与主要内容 | 第31-32页 |
| 第2章 海藻多糖降解细菌的筛选及两株新菌的鉴定 | 第32-53页 |
| 2.1 材料与方法 | 第32-33页 |
| 2.1.1 菌株 | 第32页 |
| 2.1.2 培养基与溶液 | 第32-33页 |
| 2.1.3 主要仪器和试剂 | 第33页 |
| 2.2 实验方法 | 第33-38页 |
| 2.2.1 样品采集及处理 | 第33-34页 |
| 2.2.2 基于遗传学的分类鉴定 | 第34-36页 |
| 2.2.3 微生物表型及生理生化特征的测定 | 第36-37页 |
| 2.2.4 化学组分分析鉴定 | 第37-38页 |
| 2.2.5 菌株保藏 | 第38页 |
| 2.3 实验结果与分析 | 第38-52页 |
| 2.3.1 底泥科迪单胞菌(Kordiimonas sediminis sp. nov.)N39~T的多相分类鉴定 | 第38-46页 |
| 2.3.2 黄色类诺卡氏菌(Nocardioides gilvus sp. nov.)XZ17~T的多相分类鉴定 | 第46-52页 |
| 2.4 本章小结 | 第52-53页 |
| 第3章 三种海藻多糖降解酶活性架构生物信息学分析 | 第53-69页 |
| 3.1 材料与方法 | 第53-58页 |
| 3.1.1 生物信息学分析软件与网站 | 第53页 |
| 3.1.2 数据获取与筛选 | 第53-58页 |
| 3.1.3 多序列比对 | 第58页 |
| 3.1.4 活性架构处氨基酸残基的筛选 | 第58页 |
| 3.1.5 海藻多糖降解酶家族活性架构区域氨基酸频率统计 | 第58页 |
| 3.1.6 海藻多糖降解酶家族活性架构区域活性中心序列谱制作 | 第58页 |
| 3.2 结果与分析 | 第58-68页 |
| 3.2.1 海藻多糖降解酶家族活性架构处氨基酸频率和偏好性分析 | 第58-60页 |
| 3.2.2 海藻多糖降解酶家族活性架构不同亚位点处氨基酸统计分析 | 第60-63页 |
| 3.2.3 海藻多糖降解酶家族活性架构的序列谱分析 | 第63-65页 |
| 3.2.4 不同的海藻多糖降解酶家族底物的识别特异性和混杂性模式 | 第65-68页 |
| 3.3 小节与讨论 | 第68-69页 |
| 第4章 褐藻胶裂解酶AlyV4的异源表达、分离纯化与酶学性质研究 | 第69-81页 |
| 4.1 材料与方法 | 第69-70页 |
| 4.1.1 菌株与质粒 | 第69页 |
| 4.1.2 主要仪器和试剂 | 第69页 |
| 4.1.3 常用培养基与缓冲液 | 第69-70页 |
| 4.2 实验方法 | 第70-74页 |
| 4.2.1 大肠杆菌BL-21 (DE3)异源表达蛋白及亲和层析 | 第70-71页 |
| 4.2.2 酶学性质测定 | 第71-72页 |
| 4.2.3 荧光辅助糖电泳(FACE)表征产物谱的变化 | 第72-73页 |
| 4.2.4 重组酶的催化动力学常数的测定 | 第73-74页 |
| 4.2.5 重组酶的降解产物分析 | 第74页 |
| 4.3 实验结果 | 第74-79页 |
| 4.3.1 AlyV4序列分析 | 第74页 |
| 4.3.2 大肠杆菌BL-21 (DE3)异源表达蛋白及亲和层析 | 第74-75页 |
| 4.3.3 重组酶酶活及酶学性质测定 | 第75-77页 |
| 4.3.4 酶的催化动力学常数的测定 | 第77-78页 |
| 4.3.5 酶的降解产物分析 | 第78页 |
| 4.3.6 AlyV4褐藻胶裂解酶的家族分类地位 | 第78-79页 |
| 4.4 小结与讨论 | 第79-81页 |
| 第5章 PL7家族褐藻胶裂解酶AlyV4活性架构处关键氨基酸残基的功能分析 | 第81-107页 |
| 5.1 材料与方法 | 第81-85页 |
| 5.1.1 主要试剂与设备 | 第81-82页 |
| 5.1.2 AlyV4活性架构区域关键氨基酸突变体蛋白的制备 | 第82-84页 |
| 5.1.3 突变体蛋白的酶活测定及催化动力学常数的测定 | 第84页 |
| 5.1.4 野生型及突变体蛋白的荧光光谱的测定 | 第84-85页 |
| 5.1.5 AlyV4褐藻胶裂解酶的同源模建 | 第85页 |
| 5.1.6 荧光辅助糖电泳表征野生型及突变体蛋白的产物谱变化 | 第85页 |
| 5.2 结果与分析 | 第85-106页 |
| 5.2.1 AlyV4褐藻胶裂解酶同源模建及蛋白质中氨基酸组成分析 | 第85-86页 |
| 5.2.2 AlyV4活性架构中突变位点的功能分析和预测 | 第86-88页 |
| 5.2.3 AlyV4活性架构中关键氨基酸突变位体酶活测定 | 第88-90页 |
| 5.2.4 AlyV4活性架构中关键氨基酸突变体的荧光光谱定量分析 | 第90-99页 |
| 5.2.5 催化所必需的氨基酸对于催化过渡态的重要作用 | 第99-101页 |
| 5.2.6 AlyV4及其突变体蛋白的产物谱分析 | 第101-106页 |
| 5.3 本章小结 | 第106-107页 |
| 第6章 总结与展望 | 第107-109页 |
| 6.1 总结 | 第107-108页 |
| 6.2 展望 | 第108-109页 |
| 附录 | 第109-114页 |
| 参考文献 | 第114-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文和参加科研情况 | 第126-127页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第127页 |
