| 致谢 | 第1-6页 |
| 摘要 | 第6-7页 |
| Abstract | 第7-9页 |
| 目录 | 第9-14页 |
| 第一章 绪论 | 第14-34页 |
| ·水通道蛋白 | 第14-17页 |
| ·水通道蛋白的结构 | 第14-16页 |
| ·水通道蛋白的高渗透性 | 第16页 |
| ·水通道蛋白的选择性 | 第16-17页 |
| ·水通道蛋白在新型仿生废水回收领域的应用 | 第17页 |
| ·深海嗜压菌Photobacterium profundum SS9 | 第17-22页 |
| ·对海洋生物水通道蛋白的探索 | 第17-19页 |
| ·Photobacterium profundum SS9 | 第19-21页 |
| ·开发P.profundum SS9新型水通道蛋白的意义 | 第21-22页 |
| ·水通道蛋白的功能测定 | 第22-26页 |
| ·由细菌生长表型定性AQP功能 | 第22-24页 |
| ·观察细胞体积变化定性AQP功能 | 第24-26页 |
| ·水通道蛋白高效表达策略研究进展 | 第26-33页 |
| ·大肠杆菌重组蛋白表达系统 | 第26-28页 |
| ·家蚕杆状病毒表达系统 | 第28-33页 |
| ·本课题拟研究内容 | 第33-34页 |
| 第二章 材料与方法 | 第34-39页 |
| ·质粒、菌株与细胞株 | 第34-35页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第35-36页 |
| ·分子生物学相关操作 | 第36-37页 |
| ·凝胶回收纯化DNA | 第36页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取 | 第36页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第36页 |
| ·转化大肠杆菌感受态细胞 | 第36页 |
| ·转化大肠杆菌转座宿主Bm-DH10Bac感受态细胞 | 第36页 |
| ·重组Bacmid的小量制备 | 第36-37页 |
| ·Bacmid转染BmN细胞及病毒扩增 | 第37页 |
| ·SDS-PAGE | 第37页 |
| ·Western-blotting | 第37-38页 |
| ·主要仪器与设备 | 第38-39页 |
| 第三章 aqpSS9基因的生物信息学分析及重组载体构建 | 第39-50页 |
| ·引言 | 第39-40页 |
| ·材料与方法 | 第40-42页 |
| ·aqpSS9基因序列信息来源 | 第40页 |
| ·生物信息学分析工具与软件 | 第40页 |
| ·质粒与菌株 | 第40-41页 |
| ·工具酶、试剂及分子生物学基本操作 | 第41页 |
| ·aqpSS9基因的获得 | 第41-42页 |
| ·重组载体的构建 | 第42页 |
| ·结果与讨论 | 第42-49页 |
| ·基因序列信息 | 第42-43页 |
| ·同源性分析 | 第43-44页 |
| ·蛋白预测 | 第44页 |
| ·功能位点预测 | 第44-45页 |
| ·疏水性分析 | 第45-46页 |
| ·跨膜结构预测 | 第46页 |
| ·稀有密码子分析 | 第46-47页 |
| ·重组载体的构建 | 第47-49页 |
| ·小结 | 第49-50页 |
| 第四章 新型水通道蛋白AqpSS9的功能分析 | 第50-64页 |
| ·引言 | 第50-51页 |
| ·材料与方法 | 第51-54页 |
| ·质粒与菌株 | 第51页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第51页 |
| ·分子生物学基本操作 | 第51页 |
| ·培养基与培养条件 | 第51页 |
| ·MM1211(aqpZ~-)内AqpSS9的表达 | 第51-52页 |
| ·细胞裂解 | 第52页 |
| ·细胞膜的分离 | 第52-53页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blotting | 第53页 |
| ·相对生长表型 | 第53-54页 |
| ·菌落PCR | 第54页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blotting | 第54页 |
| ·结果与讨论 | 第54-63页 |
| ·AqpSS9的表达和定位判断 | 第54-55页 |
| ·MM/AqpSS9低渗环境中的相对生长型 | 第55-61页 |
| ·菌落PCR | 第61-63页 |
| ·小结 | 第63-64页 |
| 第五章 大肠杆菌体系AqpSS9的表达及条件优化 | 第64-74页 |
| ·引言 | 第64-65页 |
| ·材料与方法 | 第65-66页 |
| ·质粒与菌株 | 第65页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第65页 |
| ·分子生物学基本操作 | 第65页 |
| ·培养基与培养条件 | 第65-66页 |
| ·大肠杆菌常规宿主内AqpSS9的表达 | 第66页 |
| ·细胞裂解 | 第66页 |
| ·细胞膜的分离 | 第66页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blotting | 第66页 |
| ·结果与讨论 | 第66-73页 |
| ·选择最佳大肠杆菌宿主表达AqpSS9 | 第66-69页 |
| ·诱导时间对8His-AqpSS9表达的影响 | 第69-70页 |
| ·温度对8His-AqpSS9表达的影响 | 第70-71页 |
| ·IPTG浓度对8His-AqpSS9表达的影响 | 第71-72页 |
| ·诱导后培养时间对8His-AqpSS9表达的影响 | 第72-73页 |
| ·小结 | 第73-74页 |
| 第六章 Bac-to-Bac家蚕杆状病毒系统有效表达AqpSS9 | 第74-85页 |
| ·引言 | 第74-75页 |
| ·材料与方法 | 第75-79页 |
| ·实验流程图 | 第75页 |
| ·细胞株、菌株及质粒 | 第75页 |
| ·工具酶与主要试剂 | 第75-76页 |
| ·重组穿梭载体Bacmid-AqpSS9的构建 | 第76-77页 |
| ·重组病毒rBmAqpSS9的构建 | 第77页 |
| ·重组病毒rBmAqpSS9的扩增 | 第77-78页 |
| ·AqpSS9在BmN细胞中的表达 | 第78页 |
| ·SDS-PAGE和Western-blotting | 第78-79页 |
| ·结果与讨论 | 第79-84页 |
| ·重组穿梭载体Bacmid-AqpSS9的构建 | 第79-81页 |
| ·重组病毒rBmAqpSS9的获得 | 第81-83页 |
| ·AqpSS9在BmN细胞中的表达 | 第83-84页 |
| ·小结 | 第84-85页 |
| 第七章 结论与展望 | 第85-88页 |
| ·结论 | 第85-86页 |
| ·展望 | 第86-88页 |
| 参考文献 | 第88-97页 |
| 作者简历 | 第97页 |
