异常黑胆质成熟剂富含多酚类提取物对H2O2诱导的PC12细胞损伤的保护作用及其机制研究
【摘要】：目的：研究异常黑胆质成熟剂富含多酚类提取物对PC12细胞增殖的影响以及防止H202氧化损伤PC12细胞的保护效果,同时初步探讨其作用机制。方法：采用乙醇提取法结合聚酰胺树脂吸附法制备ASM-PE,以没食子酸为对照,福林酚(Folin-Ciocalteu, FC)比色法测定ASM醇提物及其分离纯化物中总酚含量；通过MTT比色法检测ASM-PE对PC12细胞增殖的影响。同时用H202诱导PC12细胞建立氧化损伤模型,通过MTT法和形态学检测ASM-PE对H202诱导PC12细胞损伤的细胞存活率的影响,进一步确定ASM-PE的保护效果；通过Hoechst 33342染色检测ASM-PE防止PC12细胞遭受H202损伤在细胞形态上的变化特征；通过Annexin-V/PI双染流式细胞仪检测ASM-PE对PC12细胞凋亡情况的影响。在ASM-PE的保护机制研究中,检测PC12细胞培养液的抗氧化酶系中SOD的活性,讨论ASM-PE对遭受氧化应激的PC12细胞内氧化与抗氧化系统之间的平衡的影响；通过免疫荧光法和Western-blotting检测ASM-PE保护PC12细胞抵抗H202氧化损伤时,细胞内Caspase-3, Bcl-2等调控细胞凋亡的相关因子的表达情况,从而初步探讨ASM-PE发挥保护作用的机制。结果：(1)经多步骤提取和纯化,该提取物中ASM-PE含量达26.58%；(2)在一定浓度范围内,检测结果发现ASM-PE对PC1 2细胞没有细胞毒性作用；(3)经过MTT法和形态学法检测得出ASM-PE能够明显的降低H2O2诱导PC12细胞产生的氧化损伤；(4)通过形态学的研究得出ASM-PE能增强PC12细胞对H2O2诱导损伤的承受能力,减少细胞核浓缩和边缘化以及凋亡小体出现等细胞凋亡的表征现象发生,能减少H202所致PC12细胞凋亡；(5)通过Hoechst 33342染色检测细胞凋亡得出ASM-PE能够PC12细胞的凋亡细胞明显少于损伤组,削弱H2O2对PC12细胞的氧化损伤；(6)通过细胞上清液的SOD水平的测定得出ASM-PE可以显著拮抗H2O2对PC12细胞SOD活性的抑制作用；(7)通过免疫荧光法及Western blotingt检测细胞内凋亡相关因子表达量发现ASM-PE能够抑制酶原型Caspace-3凋亡蛋白的表达,且提高Bcl-2抗凋亡蛋白的表达。结论：在一定浓度范围内,ASM-PE对PC12细胞没有毒性,且能够降低H202诱导PC12细胞发生氧化损伤,改善细胞凋亡表征现象的发生。其可能的机制为：ASM-PE通过增加SOD等抗氧化酶系,降低因H202诱导产生的ROS；此外,ASM-PE发挥保护作用的机制还可能通过抑制细胞凋亡触发因子(如ROS)激活Caspase-3等促凋亡因子表达,并增强Bcl-2等抗凋亡因子表达,调节细胞凋亡信号通路,发挥保护细胞存活的作用。
【关键词】：异常黑胆质成熟剂富含多酚类提取物 PC12细胞 氧化应激
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R29
