| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-8页 |
| 缩略词表 | 第8-11页 |
| 引言 | 第11-32页 |
| 1 植酸酶的研究进展 | 第11-24页 |
| ·植酸 | 第11-14页 |
| ·植酸理化特性 | 第11-12页 |
| ·植酸抗营养作用 | 第12-14页 |
| ·植酸酶的研究进展 | 第14-24页 |
| ·植酸酶作用机制 | 第14-15页 |
| ·植酸酶分类 | 第15-22页 |
| ·植酸酶的应用 | 第22-24页 |
| 2 毕赤酵母表达系统应用前景 | 第24-30页 |
| ·微生物表达系统 | 第24-25页 |
| ·毕赤酵母表达系统的特点 | 第25-30页 |
| ·宿主菌株类型 | 第26-27页 |
| ·表达载体 | 第27-30页 |
| 3 研究目的、意义和内容 | 第30-32页 |
| ·研究目的和意义 | 第30-31页 |
| ·研究方案流程 | 第31-32页 |
| 第一章 YrAPPA基因的合成与测序 | 第32-46页 |
| 1 实验材料和方法 | 第32-42页 |
| ·实验材料 | 第32-34页 |
| ·菌株和质粒 | 第32-33页 |
| ·试剂盒和生化试剂 | 第33页 |
| ·主要仪器和培养基 | 第33-34页 |
| ·试验方法 | 第34-39页 |
| ·密码子优化和引物合成 | 第34-37页 |
| ·PCR 扩增合成目的基因 | 第37-38页 |
| ·DNA胶回收 | 第38-39页 |
| ·重组表达载体的构建及测序 | 第39-42页 |
| ·T载体克隆和测序 | 第39-42页 |
| ·T载体克隆 | 第39-40页 |
| ·大肠杆菌（DH5α）感受态的制备 | 第40页 |
| ·重组T载体转化大肠杆菌 | 第40-41页 |
| ·质粒抽提 | 第41-42页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第42页 |
| ·测序 | 第42页 |
| 2 结果分析 | 第42-45页 |
| ·DNA合成和测序 | 第42-43页 |
| ·序列比对 | 第43-45页 |
| 3 讨论 | 第45-46页 |
| 第二章 YrAPPA基因在毕赤酵母中诱导表达和分离纯化 | 第46-58页 |
| 1 实验材料和方法 | 第46-55页 |
| ·实验材料 | 第46-48页 |
| ·菌株和质粒 | 第46-47页 |
| ·生化试剂和主要仪器 | 第47页 |
| ·培养基和其他溶液 | 第47-48页 |
| ·实验方法 | 第48-55页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第48-50页 |
| ·电击转化表达毕赤酵母 | 第50-52页 |
| ·重组表达载体线性化 | 第50页 |
| ·毕赤酵母感受态的制备 | 第50-51页 |
| ·电击转化毕赤酵母 | 第51页 |
| ·阳性转化子筛选 | 第51-52页 |
| ·重组植酸酶的分泌表达和分离纯化 | 第52-53页 |
| ·SDS-PAGE鉴定和蛋白含量测定 | 第53-55页 |
| ·SDS-PAGE鉴定 | 第53-54页 |
| ·蛋白含量测定 | 第54-55页 |
| 2 结果分析 | 第55-57页 |
| ·YrAPPA基因转化和异源表达 | 第55页 |
| ·SDS-PAGE和蛋白含量的测定 | 第55-57页 |
| 3 讨论 | 第57-58页 |
| 第三章 YrAPPA植酸酶的酶学特性的研究和对比 | 第58-67页 |
| 1 材料和方法 | 第58-62页 |
| ·实验材料 | 第58-59页 |
| ·生化试剂和主要仪器 | 第58-59页 |
| ·溶液配方 | 第59页 |
| ·实验方法 | 第59-62页 |
| ·酶活的测定 | 第59-60页 |
| ·重组YrAPPA植酸酶酶促动力反应学参数的测定 | 第60页 |
| ·重组YrAPPA植酸酶的最适反应温度和温度稳定性 | 第60-61页 |
| ·重组植酸酶的最适 p H 和 p H 稳定性研究 | 第61页 |
| ·金属离子对YrAPPA植酸酶活性的作用 | 第61页 |
| ·两种消化蛋白酶对YrAPPA重组植酸酶活性的作用 | 第61-62页 |
| 2 结果分析 | 第62-66页 |
| ·Yr APPA植酸酶酶促动力反应学参数 | 第62页 |
| ·重组植酸酶最适温度和热稳定 | 第62-64页 |
| ·重组植酸酶最适pH和pH稳定性 | 第64页 |
| ·不同金属离子对Yr APPA植酸酶活性的作用 | 第64-65页 |
| ·消化蛋白酶对YrAPPA植酸酶活性的作用 | 第65-66页 |
| 3 讨论 | 第66-67页 |
| 本文结论和创新点 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-73页 |
| 附录 | 第73-76页 |
| 硕士期间发表的文章 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
