| 摘要 | 第1-16页 |
| Abstract | 第16-20页 |
| 缩略词表 | 第20-23页 |
| 第一章 绪论 | 第23-41页 |
| ·乳酸菌简介 | 第23-26页 |
| ·嗜热链球菌的抗氧化机制 | 第26-29页 |
| ·嗜热链球菌简介 | 第26-27页 |
| ·O_2的消除 | 第27-28页 |
| ·O_2~-的消除 | 第28-29页 |
| ·H_2O_2的消除 | 第29页 |
| ·染料过氧化物酶 | 第29-31页 |
| ·过氧化物酶分类 | 第29-30页 |
| ·真菌来源的染料过氧化物酶 | 第30页 |
| ·细菌来源的染料过氧化物酶 | 第30-31页 |
| ·双精氨酸转运系统 | 第31-35页 |
| ·TatA和TatB蛋白的结构与功能 | 第32-33页 |
| ·TatC蛋白的结构和功能 | 第33页 |
| ·Tat系统的转运机制 | 第33-34页 |
| ·大肠杆菌中常用的Tat系统报告蛋白 | 第34-35页 |
| ·最小化Tat系统 | 第35页 |
| ·乳酸菌碳源代谢调控中的碳源代谢物抑制 | 第35-39页 |
| ·乳酸菌中的CCR | 第36-37页 |
| ·乳酸菌CcpA的性质 | 第37页 |
| ·CcpA对乳酸菌发酵速度和类型的调控 | 第37-38页 |
| ·CcpA在乳酸菌中的其他作用 | 第38页 |
| ·发酵乳杆菌 | 第38-39页 |
| ·本研究内容 | 第39-41页 |
| 第二章 Streptococcus thermophilus CGMCC7.179染料过氧化物酶efeB基因的遗传组成和抗氧胁迫能力 | 第41-65页 |
| ·材料与方法 | 第42-55页 |
| ·菌株、质粒和生长条件 | 第42-44页 |
| ·培养基及试剂 | 第44-48页 |
| ·S.thermophilus CGMCC7.179的基因组DNA提取 | 第48页 |
| ·生物信息学分析 | 第48-49页 |
| ·载体构建 | 第49-51页 |
| ·基因敲除及验证 | 第51-52页 |
| ·CFU测定方法 | 第52页 |
| ·嗜热链球菌抗氧化压力能力测定 | 第52页 |
| ·efeB基因的遗传回补 | 第52页 |
| ·EfeB信号肽的分泌分析 | 第52-53页 |
| ·EfeB和TatC在大肠杆菌Tat缺陷株中的共表达 | 第53-54页 |
| ·实时定量PCR转录分析 | 第54-55页 |
| ·结果 | 第55-62页 |
| ·S. thermophilus CGMCC 7.179染料过氧化物酶efeB基因的遗传组成 | 第55-56页 |
| ·S. thermophilus CGMCC 7.179 efeB基因和tatC基因突变株的构建 | 第56页 |
| ·efeB基因的抗氧化能力 | 第56-57页 |
| ·TatC对EfeB抗氧化能力的影响 | 第57-59页 |
| ·EfeB与Tat系统的关系 | 第59-60页 |
| ·Tat系统对EfeB的转运 | 第60-61页 |
| ·有氧环境对efeB和tatC基因转录的调控 | 第61-62页 |
| ·讨论 | 第62-65页 |
| 第三章 Streptococcus thermophilus CGMCC7.179 EfeB的功能研究 | 第65-81页 |
| ·材料与方法 | 第65-71页 |
| ·菌株和生长条件 | 第65-66页 |
| ·培养基及试剂 | 第66-67页 |
| ·生物信息学分析 | 第67-68页 |
| ·EfeB的表达及纯化 | 第68-69页 |
| ·EfeB的诱导表达 | 第68页 |
| ·EfeB的纯化 | 第68-69页 |
| ·EfeB过氧化物酶酶活的测定 | 第69页 |
| ·EfeB过氧化物酶酶活最适pH的测定 | 第69-70页 |
| ·EfeB过氧化物酶酶活最适温度的测定 | 第70页 |
| ·金属离子对EfeB过氧化物酶酶活的影响 | 第70页 |
| ·嗜热链球菌在CDM中的培养 | 第70-71页 |
| ·过氧化氢浓度的测定 | 第71页 |
| ·细菌显微观察 | 第71页 |
| ·efeB对嗜热链球菌利用Fe~(2+)的影响 | 第71页 |
| ·efeB对嗜热链球菌利用Fe~(3+)的影响 | 第71页 |
| ·结果 | 第71-79页 |
| ·EfeB的结构特征 | 第71-73页 |
| ·EfeB过氧化物酶酶活的确定 | 第73-74页 |
| ·EfeB染料过氧化物酶的酶学性质 | 第74-75页 |
| ·摇动培养CDM的选择 | 第75-76页 |
| ·EfeB对过氧化氢的消除 | 第76-77页 |
| ·S. thermophilus CGMCC7.179 EfeB对铁离子价态的转化作用 | 第77页 |
| ·1.6mM Fe~(2+)和Fe~(3+)对嗜热链球菌细胞形态的影响 | 第77-79页 |
| ·讨论 | 第79-81页 |
| 第四章 Streptococcus thermophilus CGMCC7.179 Tat系统组分功能研究 | 第81-97页 |
| ·材料与方法 | 第82-87页 |
| ·菌株、质粒和生长条件 | 第82-83页 |
| ·培养基及试剂 | 第83-85页 |
| ·生物信息学分析 | 第85页 |
| ·染色体提取 | 第85页 |
| ·载体构建 | 第85-86页 |
| ·基因敲除及验证 | 第86页 |
| ·S. thermophilus CGMCC7.179 Tat基因的异源表达 | 第86-87页 |
| ·SDS抗性检测 | 第87页 |
| ·显微观察 | 第87页 |
| ·结果 | 第87-94页 |
| ·S. thermophilus CGMCC7.179 TatA和TatC的结构特征 | 第87-89页 |
| ·S. thermophilus CGMCC7.179 TatA和TatC的功能研究 | 第89-93页 |
| ·E. coli DE3 Tat系统组分突变株的构建和回补 | 第89-90页 |
| ·S. thermophilus CGMCC7.179 TatA和TatC抵抗SDS的能力 | 第90-91页 |
| ·E. coli DE3 Tat系统组分突变株和回补菌株的细胞形态 | 第91-92页 |
| ·PlxArA的细胞形态 | 第92-93页 |
| ·AmiA在E. coli DE3中的作用 | 第93-94页 |
| ·讨论 | 第94-97页 |
| 第五章 Streptococcus thermophilus CGMCC7.179 Tat系统在乳酸乳球菌中的利用 | 第97-115页 |
| ·材料与方法 | 第98-103页 |
| ·菌株、质粒和生长条件 | 第98-99页 |
| ·培养基及试剂 | 第99-100页 |
| ·基因组DNA及质粒提取 | 第100-101页 |
| ·载体构建及验证 | 第101-102页 |
| ·菌株抗氧化能力检测 | 第102页 |
| ·乳酸乳球菌胞内蛋白提取 | 第102-103页 |
| ·培养液中蛋白质的提取 | 第103页 |
| ·Western blot | 第103页 |
| ·结果 | 第103-113页 |
| ·低表达量EfeB和TatCA对乳酸乳球菌抗氧能力的影响 | 第103-106页 |
| ·低表达量EfeB和TatCA对Lc.Lactis摇动培养的影响 | 第104-105页 |
| ·低表达量EfeB和TatCA对Lc.Lactis H_2O_2抗性的影响 | 第105-106页 |
| ·高表达量EfeB和TatCA对乳酸乳球菌抗H_2O_2能力的影响 | 第106-109页 |
| ·TatCA和spGFP在乳酸乳球菌中的串联表达 | 第109-111页 |
| ·TatCA和spNuc在乳酸乳球菌中的串联表达 | 第111-113页 |
| ·讨论 | 第113-115页 |
| 第六章 Lactobacillus fermentum 1001碳源利用脱阻遏机制研究 | 第115-132页 |
| ·材料与方法 | 第116-123页 |
| ·质粒、菌株和生长条件 | 第116-118页 |
| ·培养基及试剂 | 第118-120页 |
| ·基因组DNA提取 | 第120页 |
| ·生物信息学分析 | 第120页 |
| ·Lact.fermentum 1001 ccpAf基因的测序 | 第120页 |
| ·实时定量PCR转录分析 | 第120-121页 |
| ·载体构建 | 第121页 |
| ·基因敲除 | 第121-122页 |
| ·CcpAf功能检测 | 第122页 |
| ·启动子活性分析 | 第122页 |
| ·糖和代谢物浓度检测 | 第122页 |
| ·Lact.fermentum 1001中表达Pfk的效果检测 | 第122-123页 |
| ·结果 | 第123-130页 |
| ·Lact.fermentum 1001消耗木糖和葡萄糖的能力 | 第123-124页 |
| ·Lact.fermentum 1001 ccpAf基因的转录和作用分析 | 第124-126页 |
| ·Plx和Plf在Lact.fermentum 1001中的启动子活性 | 第126-127页 |
| ·外源磷酸果糖激酶对Lact.fermentum 1001的影响 | 第127-129页 |
| ·Plx和Plf在Lact.casei BL23中的启动子活性 | 第129-130页 |
| ·讨论 | 第130-132页 |
| 结论与展望 | 第132-133页 |
| 参考文献 | 第133-156页 |
| 攻读博士期间发表论文 | 第156-157页 |
| 致谢 | 第157-158页 |
| 外文写作 | 第158-159页 |
| 附录 | 第159-183页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第183页 |
