| 摘要 | 第1-7页 |
| Abstract | 第7-15页 |
| 1 文献综述 | 第15-31页 |
| ·引言 | 第15页 |
| ·基因组编辑方法 | 第15-19页 |
| ·依赖Cre/loxP和Flp/FRT基因组编辑 | 第15-17页 |
| ·通过“pop-in/pop-out”实现的基因组无痕编辑 | 第17页 |
| ·依赖识别特定序列的核酸酶的基因组编辑技术 | 第17-19页 |
| ·重组微生物生产脂肪酸及衍生生物燃料的代谢工程 | 第19-25页 |
| ·脂肪酸和脂肪醇分析方法 | 第19-20页 |
| ·微生物生产生物燃料的研究进展 | 第20-22页 |
| ·大肠杆菌生产脂肪醇的研究进展 | 第22-25页 |
| ·合成生物学应用于大肠杆菌代谢工程 | 第25-28页 |
| ·合成启动子应用于大肠杆菌代谢工程 | 第25-26页 |
| ·密码子优化应用于大肠杆菌代谢工程 | 第26-27页 |
| ·RBS计算应用于大肠杆菌代谢工程 | 第27-28页 |
| ·本论文研究的目的及工作设想 | 第28-31页 |
| 2 串联重复序列辅助的大肠杆菌基因组编辑方法 | 第31-55页 |
| ·引言 | 第31-32页 |
| ·实验材料 | 第32-38页 |
| ·试剂与仪器 | 第32-34页 |
| ·引物、菌株和质粒 | 第34-37页 |
| ·培养基 | 第37-38页 |
| ·主要溶液 | 第38页 |
| ·试验方法 | 第38-48页 |
| ·大肠杆菌热激感受态的制备与转化 | 第38-39页 |
| ·大肠杆菌电转化感受态的制备与转化 | 第39-40页 |
| ·抗性标记基因的删除 | 第40页 |
| ·基因组无痕编辑 | 第40-46页 |
| ·cat-sacB片段制备 | 第40-41页 |
| ·基因无痕敲除 | 第41-42页 |
| ·基因无痕替换 | 第42-44页 |
| ·基因无痕插入 | 第44-46页 |
| ·基因组无痕编辑过程的优化 | 第46-48页 |
| ·蔗糖加入时刻的优化 | 第46-47页 |
| ·在蔗糖培养基中传代次数的优化 | 第47页 |
| ·转接时间的优化 | 第47-48页 |
| ·结果与讨论 | 第48-53页 |
| ·cat-sacB片段的构建 | 第48页 |
| ·基因删除 | 第48-50页 |
| ·基因替换和插入 | 第50-51页 |
| ·基因组无痕编辑过程的优化 | 第51-53页 |
| ·蔗糖加入时刻对重组率的影响 | 第51-52页 |
| ·传代次数对重组率的影响 | 第52-53页 |
| ·传代时刻对重组率的影响 | 第53页 |
| ·小结 | 第53-55页 |
| 3 发酵液中脂肪酸和脂肪醇的分析 | 第55-75页 |
| ·引言 | 第55页 |
| ·材料和方法 | 第55-58页 |
| ·试剂与仪器 | 第55-57页 |
| ·菌株和质粒 | 第57页 |
| ·培养基 | 第57-58页 |
| ·试验方法 | 第58-62页 |
| ·标准品的准备 | 第58页 |
| ·液相分析方法的优化 | 第58-60页 |
| ·流动相比例的优化 | 第58-59页 |
| ·流动相流速的优化 | 第59页 |
| ·色谱柱温度的优化 | 第59-60页 |
| ·标准曲线和检测线的测定 | 第60页 |
| ·提取方法的优化 | 第60-61页 |
| ·分析方法的准确性和实用性分析 | 第61-62页 |
| ·提取方法加样回收率分析 | 第61页 |
| ·分析方法稳定性分析 | 第61-62页 |
| ·分析方法实用性分析 | 第62页 |
| ·结果与讨论 | 第62-74页 |
| ·HPLC-RID的参数选择 | 第62-65页 |
| ·流动相组成 | 第63-64页 |
| ·流速对检测结果的影响 | 第64页 |
| ·柱温对检测结果的影响 | 第64-65页 |
| ·标准品的测定 | 第65-66页 |
| ·利用正交试验优化提取过程 | 第66-70页 |
| ·分析方法应用分析 | 第70-74页 |
| ·加样回收率测定 | 第70-71页 |
| ·分析方法稳定性检验 | 第71-72页 |
| ·分析方法应用研究 | 第72-74页 |
| ·小结 | 第74-75页 |
| 4 脂肪酸饥饿强化脂肪醇合成 | 第75-91页 |
| ·引言 | 第75-76页 |
| ·材料和方法 | 第76-80页 |
| ·试剂与仪器 | 第76-78页 |
| ·本章所用引物、菌株和质粒 | 第78-79页 |
| ·培养基 | 第79-80页 |
| ·试验方法 | 第80-82页 |
| ·海洋杆菌基因组的制备 | 第80页 |
| ·脂酰还原酶表达载体的构建 | 第80-81页 |
| ·副产物代谢路径基因的删除 | 第81页 |
| ·发酵菌株的构建 | 第81-82页 |
| ·酯解酶删除对菌体生长的影响的测定 | 第82页 |
| ·酯解酶删除对菌体转录组的影响测定 | 第82页 |
| ·工程菌株摇瓶发酵和脂肪醇产量检测 | 第82页 |
| ·最优菌株发酵罐发酵和脂肪醇产量的检测 | 第82页 |
| ·结果与讨论 | 第82-89页 |
| ·酯解酶分别删除对菌体的影响 | 第82-84页 |
| ·酯解酶连续删除对脂肪醇生产的影响 | 第84-85页 |
| ·酯解酶删除对工程菌株代谢流的影响 | 第85-87页 |
| ·副产物代谢路径基因的删除对脂肪醇生产的影响 | 第87-88页 |
| ·脂肪醇生产的补料发酵 | 第88-89页 |
| ·小结 | 第89-91页 |
| 5 核糖体结合序列改造强化脂肪醇合成 | 第91-103页 |
| ·引言 | 第91页 |
| ·材料和方法 | 第91-93页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第91页 |
| ·引物,菌株和质粒 | 第91-93页 |
| ·培养基 | 第93页 |
| ·试验方法 | 第93-95页 |
| ·RBS的计算 | 第93页 |
| ·RBS的整合 | 第93-95页 |
| ·发酵培养基与发酵条件 | 第95页 |
| ·脂肪醇产量的检测 | 第95页 |
| ·结果与讨论 | 第95-101页 |
| ·fabH RBS区的改造菌株的构建 | 第95页 |
| ·fabH RBS区的改造对脂肪醇产量的影响 | 第95-97页 |
| ·fabZ RBS区的改造菌株的构建 | 第97页 |
| ·fabZ RBS区的改造对脂肪醇产量的影响 | 第97-98页 |
| ·fabH fabZ RBS区同时改造菌株的构建 | 第98-99页 |
| ·fabH、fabZ RBS区同时改造对脂肪醇产量的影响 | 第99-100页 |
| ·菌株MGLHZS/pL1的补料发酵结果 | 第100-101页 |
| ·小结 | 第101-103页 |
| 6 结论与展望 | 第103-107页 |
| ·主要结论 | 第103-104页 |
| ·创新之处 | 第104页 |
| ·今后的工作建议 | 第104-107页 |
| 生化名词缩写表 | 第107-109页 |
| 参考文献 | 第109-119页 |
| 附件 | 第119-131页 |
| 个人简历及发表文章目录 | 第131-133页 |
| 致谢 | 第133页 |