| 目录 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-12页 |
| 英文缩写符号及中英对照表 | 第12-13页 |
| 文献综述 | 第13-20页 |
| 1.病原学 | 第13-14页 |
| ·分类地位 | 第13页 |
| ·理化性质 | 第13页 |
| ·病毒培养特性 | 第13-14页 |
| ·基因组及编码蛋白 | 第14页 |
| 2.流行病学 | 第14-16页 |
| ·流行情况及分布 | 第14-15页 |
| ·易感动物 | 第15页 |
| ·传播途径 | 第15-16页 |
| 3.BCoV 诊断技术 | 第16-20页 |
| ·病原学检测 | 第16页 |
| ·电镜观察 | 第16页 |
| ·病毒的分离与鉴定 | 第16页 |
| ·血清学检测 | 第16-17页 |
| ·血凝和血凝抑制试验 | 第16-17页 |
| ·中和试验 | 第17页 |
| ·酶联免疫吸附试验 | 第17页 |
| ·分子生物学检测 | 第17-20页 |
| ·常规 PCR | 第17页 |
| ·巢式 PCR | 第17-18页 |
| ·多重 PCR | 第18页 |
| ·实时荧光定量 PCR | 第18页 |
| ·RT-LAMP | 第18-20页 |
| 第一章 牛冠状病毒 SYBR Green I 荧光定量 PCR 检测方法的建立及优化 | 第20-36页 |
| 1 实验材料 | 第20-22页 |
| ·菌株、质粒、病料 | 第20页 |
| ·主要仪器设备 | 第20-21页 |
| ·主要试剂 | 第21页 |
| ·实验所用溶液及其配置 | 第21-22页 |
| 2 实验方法 | 第22-29页 |
| ·特异性引物的设计与合成 | 第22-23页 |
| ·病毒 RNA 的提取 | 第23页 |
| ·cDNA 的合成 | 第23页 |
| ·常规 RT-PCR 方法的建立及优化 | 第23-24页 |
| ·PCR 产物的琼脂糖凝胶电泳检测 | 第24-25页 |
| ·PCR 产物的凝胶回收 | 第25页 |
| ·PCR 产物的连接 | 第25页 |
| ·连接产物的转化 | 第25-26页 |
| ·质粒提取 | 第26-27页 |
| ·重组质粒酶切鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒测序鉴定 | 第27页 |
| ·重组质粒浓度的测定 | 第27页 |
| ·荧光定量 PCR 标准曲线的建立 | 第27-28页 |
| ·荧光定量 PCR 熔解曲线的建立 | 第28页 |
| ·荧光定量 PCR 特异性检测 | 第28页 |
| ·荧光定量 PCR 敏感性检测 | 第28页 |
| ·荧光定量 PCR 重复性检测 | 第28-29页 |
| 3 实验结果 | 第29-34页 |
| ·牛冠状病毒 N 基因片段的克隆 | 第29页 |
| ·牛冠状病毒 N 基因片段的测序鉴定 | 第29-30页 |
| ·重组质粒的酶切鉴定 | 第30页 |
| ·重组质粒的浓度测定 | 第30页 |
| ·荧光定量 PCR 反应条件的确定 | 第30-32页 |
| ·荧光定量 PCR 标准曲线的建立 | 第32-33页 |
| ·荧光定量 PCR 特异性检测结果 | 第33页 |
| ·荧光定量 PCR 敏感性检测结果 | 第33-34页 |
| ·荧光定量 PCR 重复性检测结果 | 第34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| 第二章 我国部分地区规模化奶牛场牛冠状病毒感染的流行病学调查 | 第36-43页 |
| 1 实验材料 | 第36页 |
| ·送检病料 | 第36页 |
| ·主要仪器设备 | 第36页 |
| ·主要试剂 | 第36页 |
| ·实验所用溶液及其配制 | 第36页 |
| 2 实验方法 | 第36-38页 |
| ·特异性引物的设计与合成 | 第36页 |
| ·病料的处理 | 第36-37页 |
| ·粪便样本的处理 | 第36页 |
| ·鼻拭子样本的处理 | 第36-37页 |
| ·病毒 RNA 的提取及 cDNA 的合成 | 第37页 |
| ·临床样本的检测 | 第37页 |
| ·常规 PCR 检测 BCoV | 第37页 |
| ·荧光定量 PCR 检测 BCoV | 第37页 |
| ·常规 PCR 检测 BEV、BVDV、IBRV 和 BPIV325 | 第37页 |
| ·牛冠状病毒 N 基因全序列的扩增 | 第37-38页 |
| ·牛冠状病毒 N 基因的系统发生分析 | 第38页 |
| 3 实验结果 | 第38-41页 |
| ·检测结果统计 | 第38-39页 |
| ·牛冠状病毒检测结果 | 第38-39页 |
| ·BEV、BVDV、IBRV 和 BPIV3 与 BCoV 混合感染检测结果 | 第39页 |
| ·牛冠状病毒 N 基因的克隆 | 第39-40页 |
| ·牛冠状病毒 N 基因的测序鉴定 | 第40页 |
| ·牛冠状病毒 N 基因的系统发生分析 | 第40-41页 |
| 4 讨论 | 第41-43页 |
| 第三章 结论 | 第43-44页 |
| 参考文献 | 第44-49页 |
| 致谢 | 第49-50页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第50页 |
