| 目录 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-14页 |
| 英文缩略词表 | 第14-15页 |
| 第1章 前言 | 第15-22页 |
| ·合成生物学发展概述 | 第15页 |
| ·合成生物学的国内外发展现状 | 第15-17页 |
| ·国外合成生物学研究进展 | 第15-16页 |
| ·国内合成生物学研究进展 | 第16-17页 |
| ·合成生物学在生物医药领域的应用 | 第17-18页 |
| ·尿酸及高尿酸血症 | 第18页 |
| ·尿酸 | 第18页 |
| ·高尿酸血症及其治疗 | 第18页 |
| ·选题依据与研究目的 | 第18-19页 |
| ·选题依据 | 第18-19页 |
| ·研究目的 | 第19页 |
| ·主要研究内容 | 第19-20页 |
| ·基础载体的构建 | 第19-20页 |
| ·双载体基因回路的功能验证 | 第20页 |
| ·单载体基因回路的构建与功能验证 | 第20页 |
| ·基于 smUox 的基因回路构建与功能验证 | 第20页 |
| ·技术路线 | 第20-21页 |
| ·研究意义 | 第21-22页 |
| 第2章 基础载体的构建 | 第22-31页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·菌种和质粒 | 第22页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第22页 |
| ·培养基及其他溶液 | 第22-23页 |
| ·实验仪器 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-27页 |
| ·化学合成基因片段 mUTs 和 hucO_8 | 第23-24页 |
| ·质粒 DNA 化学转化至大肠杆菌 DH5 感受态 | 第24页 |
| ·单克隆挑取及菌液培养 | 第24页 |
| ·菌液保存及复苏 | 第24页 |
| ·大肠杆菌质粒 DNA 提取 | 第24-25页 |
| ·质粒 DNA 双酶切鉴定 | 第25-26页 |
| ·质粒 DNA 双酶切回收 | 第26页 |
| ·DNA 琼脂糖凝胶电泳 | 第26页 |
| ·DNA 凝胶片段回收 | 第26-27页 |
| ·目的片段连接 | 第27页 |
| ·实验结果 | 第27-29页 |
| ·pMD18T-mUTs 和 pMD18T-hucO8酶切验证结果 | 第27-28页 |
| ·pSEAP-hucO8的构建 | 第28-29页 |
| ·pcDNA3.1/V5-mUTs 的构建 | 第29页 |
| ·小结 | 第29-31页 |
| 第3章 双载体基因回路的功能验证 | 第31-43页 |
| ·实验材料 | 第31-32页 |
| ·细胞株和质粒 | 第31页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第31页 |
| ·培养基及其他溶液 | 第31-32页 |
| ·实验仪器 | 第32页 |
| ·实验方法 | 第32-35页 |
| ·HeLa 细胞复苏 | 第32页 |
| ·HeLa 细胞传代培养 | 第32-33页 |
| ·HeLa 细胞冻存 | 第33页 |
| ·细胞计数及接种 24 孔细胞培养板 | 第33页 |
| ·转染用质粒提取 | 第33-34页 |
| ·Lipofectamine 2000 转染 HeLa 细胞 | 第34页 |
| ·SEAP 化学发光检测 | 第34-35页 |
| ·MTT 实验 | 第35页 |
| ·实验结果 | 第35-41页 |
| ·转染条件及检测时间摸索 | 第35-38页 |
| ·回路基本原理验证 | 第38-39页 |
| ·回路对尿酸感应作用分析 | 第39-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| ·小结 | 第42-43页 |
| 第4章 单载体基因回路的构建与功能验证 | 第43-57页 |
| ·实验材料 | 第43-45页 |
| ·菌种质粒及细胞株 | 第43页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第43页 |
| ·培养基及其他溶液 | 第43-44页 |
| ·实验仪器 | 第44-45页 |
| ·实验方法 | 第45-48页 |
| ·质粒 DNA 转化大肠杆菌 DH5 感受态 | 第45页 |
| ·单克隆挑取、菌夜培养及质粒 DNA 提取 | 第45页 |
| ·PCR 基因改造 | 第45-46页 |
| ·PCR 产物回收及连接 T 载体 | 第46页 |
| ·DNA 双酶切鉴定 | 第46-47页 |
| ·DNA 双酶切回收 | 第47-48页 |
| ·目的片段连接 | 第48页 |
| ·细胞计数、铺板及转染 | 第48页 |
| ·SEAP 化学发光检测 | 第48页 |
| ·实验结果 | 第48-55页 |
| ·PCR 改造 mUTs 基因 | 第48-49页 |
| ·pBudCE4.1-SEAP 的构建 | 第49-50页 |
| ·pBudCE4.1-SEAP 功能验证 | 第50-51页 |
| ·pBudCE4.1-SEAP-mUTs 的构建 | 第51-52页 |
| ·单载体回路基本功能验证 | 第52-54页 |
| ·回路对尿酸感应作用分析 | 第54-55页 |
| ·讨论 | 第55-56页 |
| ·小结 | 第56-57页 |
| 第5章 基于 smUox 的基因回路构建与功能验证 | 第57-73页 |
| ·实验材料 | 第57-59页 |
| ·菌种和质粒 | 第57页 |
| ·主要试剂和试剂盒 | 第57页 |
| ·培养基及其他溶液 | 第57-58页 |
| ·实验仪器 | 第58-59页 |
| ·实验方法 | 第59-63页 |
| ·基因 smUox 的化学合成 | 第59页 |
| ·质粒提取 | 第59-60页 |
| ·DNA 双酶切鉴定 | 第60页 |
| ·DNA 双酶切回收 | 第60-61页 |
| ·目的片段连接 | 第61页 |
| ·细胞计数、铺板及转染 | 第61-62页 |
| ·尿酸检测 | 第62页 |
| ·尿酸酶检测 | 第62-63页 |
| ·实验结果 | 第63-71页 |
| ·尿酸和尿酸酶标准曲线 | 第63-64页 |
| ·phucO8-smUox 的构建 | 第64-65页 |
| ·pBudCE4.1-smUox 的构建 | 第65-66页 |
| ·pBudCE4.1-smUox 功能验证 | 第66-67页 |
| ·pBudCE4.1-mUTs-smUox 的构建 | 第67页 |
| ·回路对尿酸调控作用分析 | 第67-71页 |
| ·讨论 | 第71页 |
| ·小结 | 第71-73页 |
| 总结与展望 | 第73-75页 |
| 总结 | 第73页 |
| 展望 | 第73-75页 |
| 参考文献 | 第75-79页 |
| 附录 | 第79-81页 |
| 文献综述 | 第81-87页 |
| 1 合成生物学概述 | 第81页 |
| 2 合成生物学的国内外发展现状 | 第81-83页 |
| 3 合成生物学在生物医药领域的应用 | 第83页 |
| 4 展望 | 第83-84页 |
| 参考文献 | 第84-87页 |
| 攻读硕士期间发表文章、申请专利、参与会议 | 第87-88页 |
| 作者简介 | 第88-89页 |
| 致谢 | 第89-90页 |
