| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-14页 |
| 1 绪论 | 第14-26页 |
| ·课题背景 | 第14-23页 |
| ·体细胞库构建 | 第15-18页 |
| ·cDNA文库 | 第18-19页 |
| ·细菌人工染色体文库 | 第19-20页 |
| ·体细胞重编程技术 | 第20-23页 |
| ·课题目标及研究内容 | 第23-26页 |
| ·课题目标 | 第23-24页 |
| ·研究内容 | 第24-26页 |
| 2 东北虎成纤维细胞系构建 | 第26-40页 |
| ·前言 | 第26页 |
| ·材料与方法 | 第26-32页 |
| ·实验动物 | 第26页 |
| ·实验主要仪器 | 第26-27页 |
| ·主要试剂 | 第27-28页 |
| ·试剂的配制 | 第28页 |
| ·实验方法 | 第28-32页 |
| ·实验结果 | 第32-37页 |
| ·东北虎成纤维细胞培养 | 第32-33页 |
| ·东北虎成纤维细胞的冻存与复苏 | 第33页 |
| ·细胞生长曲线 | 第33页 |
| ·细胞培养生物学检测 | 第33页 |
| ·核型分析 | 第33-35页 |
| ·同工酶检测结果 | 第35-36页 |
| ·脂质体介导外源基因表达 | 第36-37页 |
| ·讨论 | 第37-39页 |
| ·东北虎成纤维细胞系构建 | 第37-38页 |
| ·东北虎成纤维细胞生物学特性研究 | 第38-39页 |
| ·本章小结 | 第39-40页 |
| 3 东北虎BAC文库构建及生物学特性研究 | 第40-54页 |
| ·前言 | 第40页 |
| ·材料与方法 | 第40-47页 |
| ·实验材料 | 第40页 |
| ·主要仪器 | 第40-41页 |
| ·主要试剂 | 第41页 |
| ·试剂配制 | 第41-43页 |
| ·实验方法 | 第43-47页 |
| ·实验结果 | 第47-51页 |
| ·高质量东北虎基因组DNA制备 | 第47页 |
| ·东北虎基因组DNA的梯度酶切 | 第47-48页 |
| ·东北虎大片段基因组DNA二次分离与电洗脱法回收酶切片段 | 第48-49页 |
| ·连接与转化 | 第49页 |
| ·东北虎BAC文库质量检测 | 第49-51页 |
| ·讨论 | 第51-53页 |
| ·制备与回收东北虎高分子量DNA | 第51-52页 |
| ·东北虎基因组大片段DNA与载体连接 | 第52页 |
| ·东北虎BAC文库的鉴定 | 第52-53页 |
| ·本章小结 | 第53-54页 |
| 4 东北虎特异组织高通量转录组测序分析 | 第54-72页 |
| ·前言 | 第54页 |
| ·材料与方法 | 第54-57页 |
| ·实验材料 | 第54页 |
| ·实验方法 | 第54-57页 |
| ·实验结果 | 第57-69页 |
| ·序列分析和拼接组装 | 第57页 |
| ·功能注释 | 第57-59页 |
| ·GO、COG分析 | 第59-62页 |
| ·Pathway分析 | 第62-68页 |
| ·东北虎全能性基因序列获取 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| ·功能基因注释 | 第69-70页 |
| ·GO与Pathway分析 | 第70-71页 |
| ·本章小结 | 第71-72页 |
| 5 东北虎全能性基因克隆及慢病毒载体构建 | 第72-84页 |
| ·前言 | 第72页 |
| ·材料与方法 | 第72-73页 |
| ·实验材料 | 第72-73页 |
| ·实验方法 | 第73-77页 |
| ·东北虎Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4扩增 | 第73-74页 |
| ·PCR产物回收纯化 | 第74页 |
| ·东北虎Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4基因的克隆 | 第74-75页 |
| ·慢病毒载体构建与病毒包装 | 第75-77页 |
| ·实验结果 | 第77-80页 |
| ·东北虎Oct4、Sox2、c-Myc和Klf4基因克隆 | 第77-78页 |
| ·慢病毒载体构建与病毒包装 | 第78-80页 |
| ·讨论 | 第80-82页 |
| ·本章小结 | 第82-84页 |
| 6 东北虎成纤维细胞诱导为多能性干细胞 | 第84-108页 |
| ·前言 | 第84页 |
| ·材料与方法 | 第84-92页 |
| ·实验材料 | 第84-86页 |
| ·实验方法 | 第86-92页 |
| ·实验结果 | 第92-104页 |
| ·东北虎iPS细胞诱导 | 第92-93页 |
| ·东北虎成纤维细胞内eGFP检测 | 第93-94页 |
| ·东北虎iPS细胞碱性磷酸酶(AP)染色分析 | 第94-95页 |
| ·东北虎iPS细胞多能性干细胞标志物检测 | 第95-99页 |
| ·real time PCR分析东北虎细胞重编程过程中多能性基因变化 | 第99-100页 |
| ·染色体核型分析 | 第100-101页 |
| ·畸胎瘤实验 | 第101-102页 |
| ·体外多分化潜能实验 | 第102-104页 |
| ·讨论 | 第104-106页 |
| ·iPS细胞诱导 | 第104-105页 |
| ·iPS细胞多潜能分化能力 | 第105-106页 |
| ·小结 | 第106-108页 |
| 结论 | 第108-110页 |
| 参考文献 | 第110-116页 |
| 附录 | 第116-128页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文 | 第128-130页 |
| 致谢 | 第130-131页 |
