环状排列黄色荧光蛋白（cpYFP）在毕赤酵母中的表达及性质研究
| 中文摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-8页 |
| 第一章 绪论 | 第8-17页 |
| ·自由基概述 | 第8-10页 |
| ·人体内氧自由基的产生及危害 | 第8-9页 |
| ·自由基的测定方法 | 第9-10页 |
| ·环状排列黄色荧光蛋白(cpYFP)概述 | 第10-11页 |
| ·环状排列黄色荧光蛋白(cpYFP)结构 | 第10-11页 |
| ·环状排列黄色荧光蛋白(cpYFP)的特性及应用 | 第11页 |
| ·外源蛋白表达体系概述 | 第11-14页 |
| ·甲醇营养型毕赤酵母表达体系 | 第12页 |
| ·pPICZα系列表达载体 | 第12-13页 |
| ·毕赤酵母表达蛋白糖基化修饰 | 第13-14页 |
| ·毕赤酵母表达体系的前景 | 第14页 |
| ·外源蛋白的纯化 | 第14页 |
| ·外源蛋白的纯化 | 第14页 |
| ·课题研究意义和主要内容 | 第14-17页 |
| ·课题研究意义 | 第14-15页 |
| ·课题研究内容 | 第15-17页 |
| 第二章 材料与方法 | 第17-34页 |
| ·实验材料及试剂 | 第17-21页 |
| ·质粒和菌株 | 第17页 |
| ·主要药品、试剂及材料 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| ·常用的溶液配制 | 第18-21页 |
| ·实验仪器 | 第21-22页 |
| ·实验方法 | 第22-34页 |
| ·目的基因的扩增 | 第22-27页 |
| ·亚克隆质粒的构建 | 第27-28页 |
| ·重组表达质粒的构建 | 第28-29页 |
| ·重组cpYFP的表达 | 第29-30页 |
| ·重组高表达量毕赤酵母的诱导条件分析 | 第30-32页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第32页 |
| ·目的蛋白的性质研究 | 第32-34页 |
| 第三章 结果与讨论 | 第34-65页 |
| ·重组cpYFP菌株的构建 | 第34-41页 |
| ·目的基因的获取与验证 | 第34页 |
| ·亚克隆载体的构建 | 第34-38页 |
| ·表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·电转化 | 第39-40页 |
| ·重组酵母的验证 | 第40-41页 |
| ·重组cpYFP基因构建小结 | 第41页 |
| ·重组cpYFP表达 | 第41-47页 |
| ·重组大肠杆菌目的蛋白的表达 | 第41-42页 |
| ·重组毕赤酵母目的蛋白的表达 | 第42-44页 |
| ·乙醇沉降浓度的确定 | 第44页 |
| ·色素去除分析 | 第44-45页 |
| ·cpYFP荧光强度的测定与比较分析 | 第45-46页 |
| ·cpYFP活性检测与比较分析 | 第46-47页 |
| ·重组cpYFP表达小结 | 第47页 |
| ·重组高表达量毕赤酵母的诱导条件分析 | 第47-52页 |
| ·重组毕赤酵母的生长曲线 | 第47-48页 |
| ·重组毕赤酵母的摇瓶条件分析 | 第48-51页 |
| ·重组毕赤酵母表达小结 | 第51-52页 |
| ·目的蛋白的分离纯化 | 第52-57页 |
| ·目的蛋白的制备 | 第52-53页 |
| ·镍柱亲和层析 | 第53-54页 |
| ·Macro-Prep EDAE弱阴离子交换层析 | 第54-56页 |
| ·重组cpYFP纯化分析 | 第56页 |
| ·重组cpYFP分离小结 | 第56-57页 |
| ·目的蛋白的性质表征 | 第57-65页 |
| ·蛋白免疫印迹 | 第57页 |
| ·质谱表征重组cpYFP分子量 | 第57-58页 |
| ·重组cpYFP糖基化分析 | 第58-62页 |
| ·重组cpYFP特异性分析 | 第62页 |
| ·重组cpYFP热稳定性研究 | 第62-63页 |
| ·重组cpYFP性质表征小结 | 第63-65页 |
| 结论与展望 | 第65-67页 |
| 结论 | 第65-66页 |
| 展望 | 第66-67页 |
| 参考文献 | 第67-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 个人简历 | 第74页 |
