中文摘要 | 第1-8页 |
ABSTRACT | 第8-10页 |
前言 | 第10-12页 |
材料与方法 | 第12-35页 |
1 实验材料 | 第12-15页 |
·仪器设备 | 第12-13页 |
·试剂来源 | 第13-14页 |
·其它 | 第14-15页 |
2 研究方法 | 第15-35页 |
·细胞培养 | 第15页 |
·构建PAAV-RIP-Ets-1过表达质粒 | 第15-19页 |
·瞬时转染和表达质粒验证 | 第19-20页 |
·RNA提取和荧光定量RT-PCR检测 | 第20-23页 |
·细胞总蛋白的提取及Western Blot检测 | 第23-26页 |
·转基因小鼠基因型鉴定 | 第26-27页 |
·转基因小鼠基因拷贝数检测 | 第27-28页 |
·免疫荧光 | 第28-31页 |
·胰岛分离和培养 | 第31-33页 |
·GSIS实验和细胞内胰岛素含量抽提 | 第33-34页 |
·动物实验:IPGTT实验和胰岛素注射实验 | 第34页 |
·统计学分析 | 第34-35页 |
结果 | 第35-48页 |
1 转基因质粒的构建及过表达验证 | 第35-36页 |
2 转基因小鼠系的建立 | 第36-42页 |
·PCR筛查基因型阳性小鼠 | 第37页 |
·荧光定量PCR检测F1代转基因小鼠胰岛中Ets-1的表达情况 | 第37-38页 |
·绝对定量检测基因拷贝数 | 第38-40页 |
·荧光定量PCR和Western Blot方法检测转基因小鼠胰岛中Ets-1的mRNA和蛋白表达情况 | 第40-41页 |
·免疫荧光观察Ets-1在胰岛β细胞系和转基因小鼠胰岛中的定位情况 | 第41-42页 |
3 胰岛B细胞特异性ETS-1转基因小鼠的表型鉴定结果 | 第42-48页 |
·转基因小鼠随年龄增长对胰岛功能的影响 | 第42-43页 |
·转基因小鼠的糖耐量及胰岛素抵抗情况 | 第43-45页 |
·转基因小鼠胰岛中与胰岛β细胞功能相关分子的mRNA水平 | 第45-46页 |
·转基因小鼠原代胰岛的GSIS功能和胰岛素含量 | 第46-48页 |
分析与讨论 | 第48-51页 |
小结 | 第51-52页 |
参考文献 | 第52-57页 |
综述 | 第57-70页 |
参考文献 | 第65-70页 |
攻读学位期间的文章 | 第70-71页 |
致谢 | 第71页 |