| 摘要 | 第1-4页 |
| ABSTRACT | 第4-12页 |
| 第一章 文献综述 | 第12-25页 |
| ·莱茵衣藻简介及其基因工程研究进展 | 第12-17页 |
| ·莱茵衣藻的遗传特点 | 第12-13页 |
| ·莱茵衣藻叶绿体基因组特点及外源基因在叶绿体中的表达 | 第13-14页 |
| ·衣藻叶绿体基因组转化的原理 | 第14页 |
| ·外源基因导入莱茵衣藻叶绿体的方法 | 第14-15页 |
| ·基因枪转化法 | 第14-15页 |
| ·玻璃珠转化法 | 第15页 |
| ·电击转化法 | 第15页 |
| ·显微注射法 | 第15页 |
| ·其他转化方法 | 第15页 |
| ·关于衣藻叶绿体启动子 | 第15-16页 |
| ·rbcL启动子 | 第16页 |
| ·atpA启动子 | 第16页 |
| ·psbA启动子 | 第16页 |
| ·psbD启动子 | 第16页 |
| ·衣藻叶绿体转化的筛选标记 | 第16-17页 |
| ·衣藻其他领域的研究进展 | 第17-20页 |
| ·微藻生产生物柴油 | 第17页 |
| ·衣藻产氢的研究 | 第17-18页 |
| ·衣藻对污水净化的研究 | 第18-19页 |
| ·衣藻基因工程方法表达药用蛋白 | 第19页 |
| ·衣藻叶绿体表达蛋白的优点 | 第19-20页 |
| ·外源基因在衣藻细胞核中基因表达存在的问题 | 第20页 |
| ·关于乙肝疫苗及其研究进展 | 第20-23页 |
| ·乙肝病毒表面抗原作用原理 | 第21-22页 |
| ·乙肝病毒基因组 | 第22页 |
| ·基因工程乙肝疫苗研究进展 | 第22-23页 |
| ·本实验研究的目的和意义 | 第23-25页 |
| 第二章 Pre-S_2_S的克隆 | 第25-35页 |
| ·实验仪器设备与材料 | 第25-35页 |
| ·仪器与主要设备 | 第25页 |
| ·菌株和DNA片段 | 第25-26页 |
| ·工具酶及试剂 | 第26页 |
| ·主要试剂的配制方法 | 第26-27页 |
| ·实验方法 | 第27-32页 |
| ·PCR扩增目的序列 | 第27页 |
| ·DNA琼脂糖凝胶电泳检测 | 第27-28页 |
| ·PCR产物回收 | 第28-29页 |
| ·TA克隆 | 第29页 |
| ·制备感受态细胞 | 第29-30页 |
| ·转化 | 第30页 |
| ·氨苄青霉素抗性筛选 | 第30页 |
| ·PCR鉴定阳性菌落 | 第30页 |
| ·大肠杆菌质粒提取 | 第30-32页 |
| ·双酶切鉴定阳性菌落质粒 | 第32页 |
| ·测序鉴定 | 第32页 |
| ·保存甘油种 | 第32页 |
| ·结果与分析 | 第32-35页 |
| ·PreS_2_S基因的PCR扩增结果 | 第32-33页 |
| ·PCR和双酶切鉴定阳性菌落 | 第33-34页 |
| ·测序结果 | 第34-35页 |
| 第三章 含PreS_2_S基因中间表达载体的构建 | 第35-52页 |
| ·质粒psk-atpA-S的构建 | 第35-37页 |
| ·psk质粒图谱 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35页 |
| ·预期构建质粒图谱 | 第35-36页 |
| ·结果与分析 | 第36-37页 |
| ·psk-atpA-S PCR鉴定 | 第36页 |
| ·psk-atpA-S双酶切鉴定 | 第36-37页 |
| ·含增强子的中间载体psk-atpA(dA)-S,psk-atpA(dAG)-S,psk-atpA(A+E)-S,psk-atpA(AG+E)-S的构建 | 第37-41页 |
| ·实验方法 | 第37页 |
| ·预期构建质粒图谱 | 第37-39页 |
| ·结果与分析 | 第39-41页 |
| ·含有筛选标记aadA基因的psk-atpA-S-aadA中间载体的构建 | 第41-46页 |
| ·实验材料 | 第41-42页 |
| ·实验方法 | 第42-43页 |
| ·酶切质粒 | 第42页 |
| ·突出末端的补平 | 第42-43页 |
| ·单酶切质粒 | 第43页 |
| ·质粒的构建 | 第43页 |
| ·结果与分析 | 第43-46页 |
| ·双酶切质粒p64D | 第43-44页 |
| ·Not Ⅰ单酶切质粒psk-atpA-S | 第44-45页 |
| ·Sac Ⅰ单酶切补平后DNA片段 | 第45页 |
| ·PCR鉴定阳性菌落 | 第45-46页 |
| ·双酶切鉴定质粒psk-atpA-S-aadA | 第46页 |
| ·含有增强子元件及筛选标记aadA基因的中间载体的构建 | 第46-50页 |
| ·实验方法 | 第46-47页 |
| ·结果与分析 | 第47-50页 |
| ·Not Ⅰ单酶切 | 第47页 |
| ·Sac Ⅰ单酶切补平后DNA片段 | 第47-48页 |
| ·PCR鉴定阳性菌落 | 第48-49页 |
| ·双酶切鉴定 | 第49-50页 |
| ·本章小结 | 第50-52页 |
| 第四章 含PreS_2_S基因的衣藻叶绿体表达载体的构建 | 第52-57页 |
| ·p64E-S表达载体的构建 | 第52-53页 |
| ·实验方法 | 第52页 |
| ·预期构建的质粒图谱 | 第52页 |
| ·结果与分析 | 第52-53页 |
| ·构建表达载体p64A-S,p64AG-S,p64AE-S,p64AGE-S | 第53-55页 |
| ·实验方法 | 第53-54页 |
| ·预期构建的质粒图谱 | 第54页 |
| ·结果与分析 | 第54-55页 |
| ·本章小结 | 第55-57页 |
| 第五章 PreS_2_S基因在衣藻叶绿体中的表达 | 第57-63页 |
| ·实验方法 | 第57-61页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·衣藻培养基 | 第57-58页 |
| ·衣藻的培养 | 第58页 |
| ·转化 | 第58-60页 |
| ·准备衣藻细胞 | 第58页 |
| ·碱裂解法大量提取质粒 | 第58页 |
| ·质粒DNA的纯化 | 第58-59页 |
| ·微粒子弹的制备 | 第59页 |
| ·衣藻的转化方法 | 第59-60页 |
| ·过渡培养 | 第60页 |
| ·筛选培养 | 第60页 |
| ·转基因藻的表征分析 | 第60页 |
| ·阳性转基因藻株PCR验证 | 第60页 |
| ·阳性转基因藻株ELISA检测 | 第60页 |
| ·酶联免疫法(ELISA)检测 | 第60-61页 |
| ·主要试剂的配制方法 | 第60页 |
| ·实验方法 | 第60页 |
| ·新鲜样品中提取蛋白 | 第60页 |
| ·酶联免疫法(ELISA)检测乙肝抗原表达量 | 第60-61页 |
| ·结果与分析 | 第61-62页 |
| ·转基因藻的表征分析 | 第61页 |
| ·转基因藻株PCR验证 | 第61-62页 |
| ·转基因阳性藻株PCR验证 | 第62页 |
| ·本章小结 | 第62-63页 |
| 结论与展望 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 攻读学位期间发表的学术论文目录 | 第69-70页 |
