内源IAA对砀山酥梨幼果萼片发育的影响及EST文库建立
| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-9页 |
| 缩略词 | 第9-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-13页 |
| ·研究目的和意义 | 第10页 |
| ·国内外研究现状 | 第10-13页 |
| 2 内容与路线 | 第13-14页 |
| ·研究内容 | 第13页 |
| ·内源激素IAA和GA含量的测定 | 第13页 |
| ·IAA氧化酶活力的测定 | 第13页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第13页 |
| ·SSH文库构建 | 第13页 |
| ·技术路线 | 第13-14页 |
| 3 材料与方法 | 第14-22页 |
| ·主要仪器 | 第14页 |
| ·内源IAA和内源GA的测定 | 第14-15页 |
| ·内源IAA和GA含量的测定 | 第14-15页 |
| ·宿萼率和脱萼率的田间调查 | 第15页 |
| ·IAA氧化酶的测定 | 第15-16页 |
| ·采样 | 第15页 |
| ·试剂X的配制 | 第15页 |
| ·水浴 | 第15页 |
| ·绘制标准曲线 | 第15-16页 |
| ·IAA氧化酶粗制酶液制备 | 第16页 |
| ·酶促反应 | 第16页 |
| ·保温与显色 | 第16页 |
| ·分光光度计测定0D值 | 第16页 |
| ·结果计算 | 第16页 |
| ·实时荧光定量PCR | 第16-17页 |
| ·提取RNA | 第16页 |
| ·反转录 | 第16页 |
| ·引物设计 | 第16-17页 |
| ·实时荧光定量PCR反应 | 第17页 |
| ·SSH文库构建及生物信息学分析 | 第17-22页 |
| ·材料 | 第17页 |
| ·总RNA提取及mRNA的分离纯化 | 第17页 |
| ·两次杂交和两次扩增 | 第17-21页 |
| ·SSH文库构建 | 第21页 |
| ·测序及EST库的建立 | 第21页 |
| ·生物信息学分析 | 第21-22页 |
| 4 结果与分析 | 第22-32页 |
| ·内源激素的测定 | 第22-25页 |
| ·盛花期后萼片发育变化 | 第22页 |
| ·CK处理幼果的内源激素变化 | 第22-23页 |
| ·三种处理条件下内源激素变化 | 第23-25页 |
| ·宿萼率与脱萼率的田间调查结果 | 第25页 |
| ·IAA氧化酶酶活的测定 | 第25-27页 |
| ·实时荧光定量PCR检测 | 第27-28页 |
| ·SSH文库构建和EST序列分析 | 第28-32页 |
| ·总RNA质量检测 | 第28页 |
| ·抑制性消减杂交结果分析 | 第28页 |
| ·阳性克隆的鉴定 | 第28-29页 |
| ·EST库建立与分析 | 第29页 |
| ·同源性比对结果 | 第29-30页 |
| ·蛋白和酶类的比对结果 | 第30-32页 |
| 5 讨论 | 第32-34页 |
| ·关于内源素和IAA氧化酶酶活测定 | 第32页 |
| ·关于荧光定量PCR | 第32页 |
| ·关于SSH技术操作 | 第32-33页 |
| ·影响梨萼片发育的关键因素 | 第33-34页 |
| 6 结论 | 第34-35页 |
| ·内源激素与萼片生长发育的关系 | 第34页 |
| ·IAA氧化酶与萼片生长发育的关系 | 第34页 |
| ·ARP基因表达与萼片生长发育的关系 | 第34页 |
| ·SSH文库构建与两种酶的比对发现 | 第34-35页 |
| 致谢 | 第35-36页 |
| 作者简介 | 第36-37页 |
| 附录A 宿萼率与脱萼率的田间调查原始数据 | 第37-38页 |
| 附录B 内源激素含量测定原始数据 | 第38-40页 |
| 附录C 185个EST序列片段 | 第40-54页 |
| 附录D 荧光定量原始数据 | 第54-57页 |
| 参考文献 | 第57-59页 |
