| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 第一章 Gli3转录抑制因子在附肢发育中的作用分析 | 第10-78页 |
| 第一节 研究背景综述 | 第10-30页 |
| ·脊椎动物附肢的发育 | 第10-13页 |
| ·Hedgehog基因的发现历程 | 第13-17页 |
| ·Shh信号通路的组成元件 | 第17-21页 |
| ·Gli基因家族 | 第21-23页 |
| ·Shh对前肢发育的调控 | 第23-25页 |
| ·条件性敲除小鼠 | 第25-30页 |
| 第二节 实验方法和步骤 | 第30-53页 |
| ·打靶载体的构建 | 第30-34页 |
| ·DNA的制备 | 第30-32页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备和转化 | 第32-33页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第33-34页 |
| ·ES细胞的培养与建株 | 第34-44页 |
| ·制备小鼠MEFs细胞 | 第34-35页 |
| ·准备MEFs滋养细胞层 | 第35-36页 |
| ·ES细胞的培养 | 第36-38页 |
| ·电穿孔法将DNA转ES细胞 | 第38-39页 |
| ·ES细胞阳性挑选克隆 | 第39-40页 |
| ·ES细胞的DNA提取 | 第40-41页 |
| ·Southern blot | 第41-44页 |
| ·Targeting小鼠的获得 | 第44-45页 |
| ·免疫印迹Western blot | 第45-46页 |
| ·小鼠骨骼染色 | 第46-47页 |
| ·小鼠胚胎原位杂交 | 第47-53页 |
| ·原位杂交地高辛标记的RNA探针合成 | 第47-48页 |
| ·原位杂交胚胎材料的固定 | 第48-49页 |
| ·原位杂交 | 第49-53页 |
| 第三节 实验结果和讨论 | 第53-67页 |
| ·条件性突变小鼠仅表达Gli3抑制子蛋白 | 第53-56页 |
| ·Gli3~(+/Δ701C)小鼠前肢的表型 | 第56-58页 |
| ·骨骼染色结果 | 第58-61页 |
| ·Gli3~(+/Δ701C)小鼠前肢的骨骼染色 | 第58-60页 |
| ·Gli3~(△701C/Δ701C)小鼠前肢表型与Shh突变小鼠类似 | 第60-61页 |
| ·Gli3~(Δ701)突变小鼠前肢表型的分子基础 | 第61-67页 |
| ·Glil和Patched1原位杂交 | 第62页 |
| ·Fgf4和Grem原位杂交 | 第62-63页 |
| ·Hand2原位杂交 | 第63-64页 |
| ·Hoxd11和Hoxd13原位杂交 | 第64页 |
| ·Shh原位杂交 | 第64-67页 |
| 参考文献 | 第67-78页 |
| 第二章 Talpid~3基因参与Sonic Hedgehog信号传导和纤毛发生机制的初步研究 | 第78-115页 |
| 第一节 研究背景综述 | 第78-84页 |
| ·初级纤毛的结构 | 第78-80页 |
| ·Hh信号在初级纤毛结构中传导 | 第80-82页 |
| ·Talpid~3基因的研究背景 | 第82-84页 |
| 第二节 实验步骤和方法 | 第84-97页 |
| ·Talpid3-/-小鼠的培育 | 第84页 |
| ·Western blot | 第84页 |
| ·细胞免疫荧光染色Cell staining | 第84-86页 |
| ·pLNCX2建立细胞系 | 第86-89页 |
| ·反转录病毒介导的基因转导 | 第86-87页 |
| ·磷酸钙介导质粒DNA转染包装细胞 | 第87-89页 |
| ·用反转录病毒转染NIH-3T3细胞 | 第89页 |
| ·质谱检测分析蛋白种类(Mass Spectrometry) | 第89-95页 |
| ·Pull down | 第89-91页 |
| ·TCA沉淀蛋白 | 第91页 |
| ·SDS-PAGE梯度凝胶电泳 | 第91-93页 |
| ·SDS-PAGE染色 | 第93页 |
| ·蛋白in gel digestion和回收 | 第93-95页 |
| ·免疫共沉淀鉴定结合蛋白 | 第95-97页 |
| 第三节 实验结果与讨论 | 第97-110页 |
| ·Taplid~(3-/-)小鼠的培育以及表型分析 | 第97-102页 |
| ·Taplid~(3-/-)小鼠的设计 | 第97-98页 |
| ·Talpid~(3-/-)MEF细胞不具有纤毛结构 | 第98-100页 |
| ·Talpid~(3-/-)MEF细胞Cep120蛋白结合位置变化 | 第100-101页 |
| ·Talpid3蛋白与Cep120蛋白相互作用 | 第101-102页 |
| ·搜寻与Taplid~3相互作用的其他蛋白 | 第102-104页 |
| ·利用Pull down和质谱方法检测与Talpid~3相互作用的蛋白 | 第102-103页 |
| ·利用Co-IP验证Talpid~3与PKA的相互作用 | 第103-104页 |
| ·蛋白deletion实验确定Talpid~3的结构域 | 第104-106页 |
| ·Western blot检测PKA蛋白的含量 | 第106-107页 |
| ·细胞染色 | 第107-110页 |
| 参考文献 | 第110-115页 |
| 致谢 | 第115-117页 |
