| 摘要 | 第1-6页 |
| 英文摘要 | 第6-12页 |
| 缩略词 | 第12-13页 |
| 1 绪论 | 第13-24页 |
| ·引言 | 第13-16页 |
| ·蝗虫对农业的危害 | 第13页 |
| ·国内外防治 | 第13-16页 |
| ·研究进展 | 第16-22页 |
| ·绿僵菌的致病机制研究 | 第16-18页 |
| ·正常产孢机制 | 第18-19页 |
| ·微循环产孢机制 | 第19-20页 |
| ·精氨酸酶研究进展 | 第20-21页 |
| ·基因敲除技术在基因功能研究中的应用 | 第21-22页 |
| ·立题依据和研究目的 | 第22页 |
| ·研究内容 | 第22-23页 |
| ·技术路线 | 第23-24页 |
| 2 材料与方法 | 第24-47页 |
| ·材料 | 第24-27页 |
| ·供试菌株和昆虫 | 第24页 |
| ·主要实验试剂和试剂盒 | 第24-25页 |
| ·主要培养基及溶液(详情见附录) | 第25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25-26页 |
| ·主要使用软件 | 第26-27页 |
| ·主要方法 | 第27-47页 |
| ·MaAGA全长引物设计及绿僵菌MaAGA基因DNA全长的获取 | 第27页 |
| ·MaAGA基因全长cDNA的获取与测序 | 第27-29页 |
| ·MaAGA的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| ·MaAGA敲除载体的构建 | 第30-32页 |
| ·农杆菌介导的绿僵菌的遗传转化 | 第32-33页 |
| ·MaAGA敲除突变体的筛选 | 第33-35页 |
| ·生物测定 | 第35-36页 |
| ·孢子萌发率的测定 | 第36-37页 |
| ·产孢量测定 | 第37页 |
| ·精氨酸胁迫产孢量测定 | 第37页 |
| ·菌落形态观察 | 第37-38页 |
| ·不同时期在微循环产孢培养基SYA及蝗虫后翅上微循环产孢的显微观察 | 第38页 |
| ·紫外耐受性测定 | 第38-39页 |
| ·耐热性测定 | 第39页 |
| ·抗胁迫能力测定 | 第39-40页 |
| ·不同浓度氮源对绿僵菌生长的影响 | 第40页 |
| ·定量RT-PCR检测MaAGA基因表达特征 | 第40-43页 |
| ·回复试验 | 第43-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-72页 |
| ·MaAGA的克隆与序列分析 | 第47-51页 |
| ·MaAGA DNA的获取 | 第47-49页 |
| ·MaAGA cDNA的克隆与测序 | 第49-50页 |
| ·MaAGA的生物信息学分析 | 第50-51页 |
| ·定量PCR检测MaAGA基因表达特征 | 第51-52页 |
| ·MaAGA敲除载体的构建与转化子验证 | 第52-54页 |
| ·MaAGA与精氨酸酶的相关性 | 第54-58页 |
| ·查式培养基上的氮源利用能力 | 第54-56页 |
| ·微循环培养基SYA上的单元利用能力 | 第56-58页 |
| ·MaAGA与微循环产孢的相关性 | 第58-63页 |
| ·菌落表型分析 | 第58-59页 |
| ·产孢特征的显微观察 | 第59-60页 |
| ·产孢量测定 | 第60-61页 |
| ·精氨酸胁迫产孢量统计 | 第61-62页 |
| ·抗胁迫能力分析 | 第62-63页 |
| ·生物测定 | 第63-65页 |
| ·孢子萌发率的测定 | 第65-66页 |
| ·MaAGA对绿僵菌抗逆性的影响 | 第66-69页 |
| ·MaAGA对绿僵菌耐热性的影响 | 第66-68页 |
| ·紫外耐受性测定 | 第68-69页 |
| ·基因回复 | 第69-72页 |
| 4 讨论 | 第72-78页 |
| ·微循环产孢机制讨论 | 第72-73页 |
| ·微循环产孢优势 | 第72页 |
| ·微循环产孢机制的相关研究 | 第72-73页 |
| ·基因功能研究的方法选择 | 第73-74页 |
| ·MaAGA编码绿僵菌的精氨酸酶 | 第74-75页 |
| ·MaAGA与真菌产孢过程相关性 | 第75-76页 |
| ·精氨酸相关的代谢途径与真菌产孢过程的关系 | 第75页 |
| ·MaAGA与绿僵菌的微循环产孢过程的关系 | 第75-76页 |
| ·MaAGA调控绿僵菌产孢过程 | 第76页 |
| ·MaAGA影响绿僵菌分生孢子的耐热性 | 第76-78页 |
| 5 主要结论及后续工作建议 | 第78-80页 |
| ·主要研究结论 | 第78页 |
| ·后续工作建议 | 第78-80页 |
| 参考文献 | 第80-84页 |
| 致谢 | 第84-86页 |
| 附录 | 第86页 |