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亚洲玉米螟GSTs RNAi干扰载体构建及功能研究

中文摘要第1-5页
Abstract第5-12页
第1章 绪论第12-21页
   ·玉米螟的危害与防治研究概况第12页
   ·应对植物杀虫化合物的昆虫抗性进化第12-14页
   ·昆虫谷胱甘肽转移酶的研究及应用第14-18页
     ·谷胱甘肽转移酶的分类及功能第14-15页
     ·GST蛋白的空间结构第15-17页
     ·昆虫GST的研究进展第17-18页
   ·cDNA文库技术简介第18-19页
   ·蛋白质组学在昆虫研究中的运用第19页
   ·RNAi干扰技术及其在昆虫研究中的运用第19-20页
   ·本研究目的与意义第20-21页
第2章 响应茉莉酸甲酯诱导玉米抗性亚洲玉米螟中肠cDNA文库及玉米螟Unigenes数据库的构建第21-42页
   ·材料与方法第21-28页
     ·供试植物与昆虫第21页
     ·本试验使用的数据和主要软件第21页
     ·主要试剂及仪器第21-22页
     ·外援茉莉酸甲酯对玉米幼苗的处理第22页
     ·诱导后叶片的亚洲玉米螟饲喂试验第22页
     ·亚洲玉米螟中肠总RNA的提取第22页
     ·cDNA第一链的合成第22-23页
     ·cDNA第二链的合成第23-24页
     ·dsDNA的纯化第24页
     ·载体构建和电转化第24-26页
     ·文库鉴定第26页
     ·本地数据库的构建第26页
     ·unigenes数据库的BLAST注释第26-27页
     ·本地数据库的验证第27-28页
   ·实验结果和分析第28-39页
     ·取食茉莉酸甲酯诱导玉米叶片的亚洲玉米螟中肠总RNA提取结果第28-29页
     ·dsDNA的合成第29页
     ·cDNA文库质量的鉴定第29-30页
     ·cDNA文库测序结果第30-36页
     ·玉米螟unigenes数据库构建及注释结果第36-38页
     ·unigenes数据库的分子生物学验证结果第38-39页
   ·本章讨论第39-41页
   ·本章小结第41-42页
第3章 响应茉莉酸甲酯诱导植物抗性亚洲玉米螟中肠定量蛋白质组学研究第42-67页
   ·材料与方法第42-46页
     ·供试昆虫、植物与饲喂试验第42页
     ·主要试剂及仪器第42-43页
     ·总蛋白提取及定量第43页
     ·iTRAQ标记与质朴鉴定第43页
     ·数据分析第43页
     ·差异表达蛋白基因片段的克隆第43-45页
     ·差异表达蛋白半定量PCR验证第45页
     ·HT115-OfAk RNAi干扰工程菌及HT115-OfCat RNAi干扰工程菌构建及功能验证第45-46页
   ·实验结果结果第46-60页
     ·差异表达倍数的确定第46-47页
     ·茉莉酸处理前后亚洲玉米螟中肠差异表达蛋第47-51页
     ·差异表达蛋白的功能分类第51-53页
     ·差异蛋白表达模式聚类分析第53-54页
     ·差异表达蛋白扩增片段PCR扩增第54-58页
     ·差异表达蛋白基因半定量PCR验证第58-59页
     ·HT115-OfAk RNAi干扰工程菌及HT115-OfCat RNAi干扰工程菌构建及功能验证第59-60页
   ·讨论第60-66页
     ·蛋白提取方法对亚洲玉米螟三龄幼虫中肠总蛋白提取的影响第60页
     ·使用iTRAQ进行亚洲玉米螟中肠蛋白质组学研究的优势第60-61页
     ·亚洲玉米螟响应经茉莉酸诱导玉米叶片蛋白表达模式图第61-64页
     ·中肠内含物中的差异表达蛋白可能具有更高的研究价值第64-65页
     ·表达蛋白的表达水平半定量分析第65页
     ·HT115-OfAK和HT115-OfCat RNAi工程菌活性分析第65-66页
   ·本章小结第66-67页
第4章 亚洲玉米螟中肠GST基因片段克隆与功能研究及RNAi干扰载体构建第67-89页
     ·材料与方法第67-71页
     ·供试昆虫与植物第67页
     ·主要试剂与仪器第67页
     ·亚洲玉米螟GSTs基因的预测与分析第67页
     ·亚洲玉米螟中肠GSTs基因的克隆第67-69页
     ·半定量PCR第69页
     ·亚洲玉米螟OfGSTd1的功能研究第69-70页
     ·HT115-OfGSTd1 RNAi干扰载体构建第70页
     ·HT115-OfGSTd1 RNAi干扰载体功能验证第70页
     ·HT115-OfGSTe1 RNAi干扰工程菌构建第70-71页
     ·四种农药对亚洲玉米螟致死浓度的测定第71页
     ·OfGSTe1的功能检测第71页
   ·实验结果与分析第71-86页
     ·玉米螟GSTs基因的预测结果第71-72页
     ·亚洲玉米螟GSTs基因的克隆结果第72页
     ·测序结果及分析第72-76页
     ·半定量PCR验证第76-78页
     ·丁布对亚洲玉米螟三龄幼虫OfGSTd1的诱导表达第78-81页
     ·HT115-OfGSTd1 RNAi干扰工程菌构建第81页
     ·HT115-OfGSTd1功能验证第81-82页
     ·OfGSTE1基因RNAi干扰载体的构建第82-83页
     ·几种农药对亚洲玉米螟致死浓度的测定第83-84页
     ·RNAi工程菌HT115-OfGSTe1饲喂试验结果第84-86页
     ·Ht115-OfGSTe1 RNAi干扰工程菌干扰效果RT-PCR验证第86页
   ·讨论第86-88页
   ·本章小结第88-89页
第5章 结论第89-90页
参考文献第90-103页
附录第103-109页
致谢第109-111页

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