毛白杨脱氢抗坏血酸还原酶家族的功能分化研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 1 引言 | 第11-18页 |
| ·活性氧(ROS)在生物体内的作用 | 第11-12页 |
| ·抗坏血酸(AsA)在植物体内的作用机制 | 第12-14页 |
| ·DHAR基因的概述 | 第14-16页 |
| ·DHAR的研究进展 | 第16-17页 |
| ·本论文研究目的和意义 | 第17-18页 |
| 2 毛白杨DHAR基因的克隆与表达模式的研究 | 第18-38页 |
| ·材料与方法 | 第18-30页 |
| ·毛白杨总RNA的提取 | 第18页 |
| ·RNA的处理 | 第18-19页 |
| ·cDNA的合成 | 第19页 |
| ·克隆引物的设计 | 第19-20页 |
| ·基因克隆 | 第20-21页 |
| ·目的基因回收 | 第21页 |
| ·重组克隆载体的构建 | 第21-23页 |
| ·连接反应 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备 | 第22-23页 |
| ·转化 | 第23页 |
| ·重组克隆载体的检测 | 第23-25页 |
| ·菌落PCR | 第23页 |
| ·重组载体质粒提取 | 第23-24页 |
| ·测序反应 | 第24-25页 |
| ·毛白杨DHAR基因的序列及结构域分析 | 第25页 |
| ·蛋白质结构模拟 | 第25页 |
| ·毛白杨DHAR基因的表达模式 | 第25-27页 |
| ·RT-PCR引物的设计 | 第25-26页 |
| ·RT-PCR反应 | 第26-27页 |
| ·亚细胞定位的分析 | 第27-30页 |
| ·重组载体的构建 | 第27-28页 |
| ·质粒的提取 | 第28页 |
| ·酶切反应 | 第28页 |
| ·连接反应 | 第28-29页 |
| ·原生质体的制备 | 第29页 |
| ·原生质体的转化 | 第29-30页 |
| ·荧光信号的检测 | 第30页 |
| ·结果分析 | 第30-38页 |
| ·毛白杨总RNA的提取 | 第30页 |
| ·PCR扩增及克隆载体构建 | 第30-31页 |
| ·测序 | 第31-32页 |
| ·蛋白结构域分析 | 第32页 |
| ·多序列重排分析 | 第32-35页 |
| ·蛋白质结构模拟 | 第35页 |
| ·毛白杨DHAR基因的表达模式分析 | 第35-36页 |
| ·毛白杨DHAR蛋白的亚细胞定位分析 | 第36-38页 |
| 3 毛白杨DHAR蛋白的表达及生化功能的研究 | 第38-47页 |
| ·材料与方法 | 第38-42页 |
| ·表达引物的设计 | 第38页 |
| ·表达载体的构建 | 第38-39页 |
| ·酶切反应 | 第39页 |
| ·载体的构建及转化 | 第39页 |
| ·重组蛋白的原核表达 | 第39-40页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第40页 |
| ·质谱分析 | 第40-41页 |
| ·凝胶过滤层析检测 | 第41页 |
| ·蛋白底物活性的测定 | 第41页 |
| ·蛋白动力学参数测定 | 第41页 |
| ·温度依赖性 | 第41-42页 |
| ·pH依赖性 | 第42页 |
| ·结果与分析 | 第42-47页 |
| ·表达载体的构建 | 第42页 |
| ·毛白杨DHAR重组蛋白的表达与纯化 | 第42-43页 |
| ·蛋白质分子量的鉴定 | 第43-44页 |
| ·毛白杨DHAR蛋白活性测定 | 第44-47页 |
| ·底物活性的测定 | 第44-45页 |
| ·酶促动力学分析 | 第45页 |
| ·温度依赖性分析 | 第45-46页 |
| ·PH依赖性分析 | 第46-47页 |
| 4 毛白杨DHAR蛋白与底物GSH结合机制的分析 | 第47-55页 |
| ·材料与方法 | 第47-49页 |
| ·蛋白质结构模拟 | 第47页 |
| ·突变体基因的克隆及表达载体构建 | 第47-48页 |
| ·蛋白质的诱导表达及分离纯化 | 第48页 |
| ·分子筛 | 第48页 |
| ·ANS荧光检测 | 第48页 |
| ·生化特性分析 | 第48-49页 |
| ·结果与分析 | 第49-55页 |
| ·毛白杨DHAR蛋白结构模拟与底物结合位点的分析 | 第49-50页 |
| ·PtoDHAR2突变体的构建 | 第50页 |
| ·PtoDHAR2突变体的表达与纯化 | 第50-51页 |
| ·PtoDHAR2突变体分子量的鉴定 | 第51-52页 |
| ·PtoDHAR2突变体蛋白的结构分析 | 第52-53页 |
| ·PtoDHAR2突变体蛋白的活性测定 | 第53-55页 |
| ·底物活性的测定 | 第53-54页 |
| ·酶促动力学分析 | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-58页 |
| 6 总结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-64页 |
| 个人简介 | 第64-65页 |
| 导师简介 | 第65-67页 |
| 致谢 | 第67页 |
