| 摘要 | 第1-10页 |
| Abstract | 第10-12页 |
| 1 前言 | 第12-19页 |
| ·绵羊肺腺瘤病 | 第12-13页 |
| ·概述 | 第12页 |
| ·发现 | 第12页 |
| ·流行病学 | 第12-13页 |
| ·绵羊肺腺瘤病毒 JSRV 的分子生物学 | 第13-14页 |
| ·JSRV 基因组结构 | 第13页 |
| ·gag 基因以及编码蛋白 | 第13-14页 |
| ·绵羊肺腺瘤病的诊断方法研究进展 | 第14-16页 |
| ·临床症状初步诊断法 | 第14页 |
| ·镜检诊断法 | 第14-15页 |
| ·免疫学诊断法 | 第15页 |
| ·分子生物学检测技术 | 第15-16页 |
| ·实时荧光定量 PCR 技术 | 第16-18页 |
| ·实时荧光定量 PCR 技术的概述及基本原理 | 第16-18页 |
| ·研究的目的及意义 | 第18-19页 |
| 2 材料与方法 | 第19-27页 |
| ·材料 | 第19-20页 |
| ·病毒及核酸样品 | 第19页 |
| ·菌株与载体 | 第19页 |
| ·主要试剂 | 第19页 |
| ·主要仪器 | 第19-20页 |
| ·方法 | 第20-27页 |
| ·gag 基因的克隆与序列分析 | 第20-22页 |
| ·探针与引物的设计 | 第22-23页 |
| ·重组质粒标准品 pMD-gag 的构建 | 第23-24页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测体系的优化 | 第24-26页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测方法的特异性实验 | 第26页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测方法的灵敏性实验 | 第26页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测方法的重复性实验 | 第26-27页 |
| 3 结果 | 第27-52页 |
| ·gag 基因的克隆结果与序列分析 | 第27-31页 |
| ·目的基因的扩增结果 | 第27页 |
| ·重组质粒 PCR 鉴定结果 | 第27-28页 |
| ·gag 基因组测序结果与分析 | 第28-31页 |
| ·实时荧光定量 PCR 检测体系的优化结果 | 第31-38页 |
| ·实时荧光 PCR 优化实验重组质粒标准品的选择 | 第31-32页 |
| ·rTaq 酶单因子浓度梯度优化实验 | 第32-33页 |
| ·dNTP 单因子浓度梯度优化实验 | 第33-34页 |
| ·探针单因子浓度梯度优化实验 | 第34-35页 |
| ·上、下游引物浓度的分析 | 第35-36页 |
| ·Mg2+单因子浓度梯度优化实验 | 第36-37页 |
| ·优化实验结果总结 | 第37-38页 |
| ·特异性实验 | 第38页 |
| ·灵敏性实验 | 第38-39页 |
| ·重复性实验 | 第39-40页 |
| ·不同地区羊肺样品的检测 | 第40-51页 |
| ·RT-PCR 与竞争性 ELISA 结果比较分析 | 第51-52页 |
| 4 讨论 | 第52-57页 |
| ·基因诊断技术 | 第52-53页 |
| ·基因的选定 | 第53页 |
| ·实时荧光定量 PCR 与常规 PCR 的不同 | 第53页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的特异性 | 第53-54页 |
| ·实时荧光定量 PCR 的影响因素 | 第54页 |
| ·实时荧光定量 PCR 阳性质粒标准品的制备 | 第54-55页 |
| ·盲测结果及与 ELISA 检测结果比对分析 | 第55页 |
| ·污染的预防和排除 | 第55-57页 |
| ·污染原因 | 第55-56页 |
| ·污染的预防和排除 | 第56-57页 |
| 5 结论 | 第57-58页 |
| 致谢 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-62页 |
| 附录 | 第62-64页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第64页 |