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大豆疫霉菌无毒基因的克隆及马铃薯抗病品种紫花白抗晚疫病机制的研究

摘要第1-4页
Abstract第4-9页
插图和附表清单第9-12页
1 文献综述第12-36页
   ·卵菌纲病原菌第12-16页
     ·大豆疫霉第13-15页
     ·马铃薯致病疫霉第15-16页
   ·卵菌的效应子第16-23页
     ·无毒基因的结构第17-18页
     ·已克隆无毒基因第18-20页
     ·卵菌效应子向寄主细胞的运输第20-23页
     ·卵菌效应子及其致病性第23页
   ·病原菌与寄主植物的互作第23-31页
     ·植物免疫系统第24-28页
     ·植物抗病反应第28-29页
     ·植物与病原菌的协同进化第29-31页
   ·分离群体分组分析法和新一代测序技术相结合克隆病原菌的无毒基因第31-34页
     ·分离群体分组分析法第32页
     ·新一代测序技术第32-34页
   ·本研究的目的及意义第34-36页
2 无毒基因 Avr1d 的克隆第36-70页
   ·材料与方法第36-51页
     ·培养基第36页
     ·供试大豆材料第36页
     ·大豆幼苗的培养第36页
     ·大豆疫霉菌致病性测定第36-37页
     ·用于 mapping Avr1d 基因群体的获得第37页
     ·目的基因的克隆和细菌转化第37-43页
     ·序列分析第43页
     ·序列多态性比对及 CAPs 标记的设计第43-46页
     ·利用基因枪瞬时表达目的基因第46-48页
     ·GUS 顺时表达分析第48页
     ·AVR1d 蛋白的表达及纯化第48-49页
     ·蛋白-脂类互作试验第49-50页
     ·蛋白-脂质体互作试验第50-51页
   ·结果与分析第51-69页
     ·RXLR 效应子 Avh6 的基因型与 Avr1d 的表型紧密连锁第51-57页
     ·单倍体型和转录分析 Avr1d 基因第57-60页
     ·无毒基因 Avr1d 的功能分析第60-64页
     ·无毒基因 Avr1d 的缺失导致菌株对含有 Rps1d 抗病基因植株的致病性第64-65页
     ·Avr1d 蛋白与 phosphatidylinositol 4-phosphate 的互作第65-69页
   ·结论第69-70页
     ·Avh6 基因型与 Avr1d 表型共分离第69页
     ·无毒基因 Avr1d 的缺失导致大豆疫霉菌对 Rps1d 的大豆植株的致病性第69页
     ·RFLR 保守区域不能转运无毒基因 Avr1d 进入大豆细胞第69页
     ·Avr1d 的效应子区与 PI4P 脂质体相结合第69-70页
3 无毒基因 Avr1c 克隆第70-91页
   ·材料与方法第70-73页
     ·分离群体分组分析法第70-71页
     ·氨基酸序列比对第71页
     ·本章节中用到的引物序列第71-73页
   ·结果与分析第73-88页
     ·Avr1c 为单显性基因第73页
     ·测试 24 个候选 Avh 基因的基因型是否与 Avr1c 的表型连锁第73-75页
     ·确定与 Avr1c 连锁的单核苷酸多态性位点第75-77页
     ·精细作图显示确定 Avr1c 在 p.sojae scaffold_7 的一个基因 cluster 中第77-86页
     ·Avr1c 功能的鉴定第86-87页
     ·Avr1c 在不同生理小种中单倍体型分析第87-88页
     ·Avr1c 的缺失导致有些大豆疫霉生理小种的致病性第88页
   ·结论第88-91页
     ·测试的 24 个候选 Avh 基因的基因型均与 Avr1c 的表型不连锁第88-89页
     ·确定无毒基因 Avr1c 在基因组上的位置第89页
     ·精细作图确定了 Avr1c 在 p.sojae scaffold 7 的一个基因 cluster 中第89页
     ·功能验证试验结果表明 Avh275c 是 Avr1c第89-90页
     ·Avr1c 在基因组中的缺失导致大豆疫霉对 Rps1c 植株具有致病性第90-91页
4 马铃薯抗晚疫病(P.infestans)机制的研究第91-99页
   ·材料与方法第91-92页
     ·供试马铃薯材料第91页
     ·马铃薯晚疫病菌游动孢子悬浮液的制备第91页
     ·接种方法第91页
     ·H_2O_2定性检测第91页
     ·抗性相关基因转录水平检测第91-92页
   ·结果第92-98页
     ·马铃薯抗病品种的鉴定第92-93页
     ·ROS 介入到了紫花白对 P.infestans 的抗病过程中第93-95页
     ·马铃薯抗感品种接种前后 ROS 清除酶活性的变化第95-96页
     ·StRboh 基因调控活性氧在抗病品种紫花白中的积累第96-97页
     ·水杨酸信号转导路径参加了马铃薯对晚疫病抗病建立过程第97-98页
   ·结论第98-99页
     ·ROS 介入了马铃薯抗病品种紫花白对晚疫病菌的抗性建立过程第98页
     ·SA 信号转导途径在马铃薯抗性建立过程中的重要作用第98-99页
5 讨论第99-106页
   ·候选 RXLR 效应子的正确筛选有助于无毒基因的克隆第99页
     ·无毒基因 Avr1d 的克隆有赖于对候选 Avh 基因的分析第99页
     ·对 Avh 基因的分析并没有给 Avr1c 的克隆提供帮助第99页
   ·寻找与 Avr1c 连锁的单核苷酸多态性位点第99-100页
   ·Avr1c 和 Avr1d 无毒基因在基因组上的缺失导致大豆疫霉病菌致病性第100-101页
   ·无毒基因的转运第101-102页
     ·无毒基因的跨膜转运的保守区域第101-102页
     ·无毒基因的跨膜转运的机制第102页
   ·植物病原菌的进化第102-104页
   ·马铃薯的抗晚疫病病机制第104-106页
致谢第106-107页
参考文献第107-124页
作者简介第124页

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