| 摘要 | 第1-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 第一章 绪论 | 第15-39页 |
| ·鱼类的性别决定 | 第15-18页 |
| ·遗传型性别决定 | 第15-17页 |
| ·型性别决定 | 第17-18页 |
| ·鱼类的性腺分化及发育 | 第18-20页 |
| ·鱼类性别决定与性腺分化相关基因 | 第20-26页 |
| ·细胞色素P450芳香化酶 | 第21-22页 |
| ·dmrt | 第22-23页 |
| ·sox基因家族 | 第23-24页 |
| ·amh | 第24-25页 |
| ·ftz-f1 | 第25-26页 |
| ·dax1基因 | 第26-31页 |
| ·dax1基因及调控 | 第26-27页 |
| ·dax1在胚胎及性腺早期发育中的作用 | 第27-28页 |
| ·dax1在性腺分化中的作用 | 第28-30页 |
| ·鱼类中dax1的研究 | 第30-31页 |
| ·性别相关的表观遗传修饰 | 第31-35页 |
| ·表观遗传修饰与DNA甲基化 | 第31-33页 |
| ·DNA甲基化的机制及作用 | 第33-34页 |
| ·性别相关基因的甲基化研究进展 | 第34-35页 |
| ·鲆鲽鱼类性别决定研究进展 | 第35-36页 |
| ·立题依据及本研究的意义 | 第36-39页 |
| 第二章 牙鲆性别相关候选基因dax1的克隆及分析 | 第39-61页 |
| ·材料与试剂 | 第39-41页 |
| ·实验材料 | 第39页 |
| ·主要仪器 | 第39-40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·质粒及菌株 | 第40页 |
| ·引物 | 第40-41页 |
| ·实验方法 | 第41-48页 |
| ·牙鲆性腺总RNA的提取及cDNA第一链的合成 | 第41-43页 |
| ·RT-PCR扩增基因cDNA保守片段 | 第43-46页 |
| ·性腺SMART cDNA的合成及PCR | 第46-47页 |
| ·牙鲆dax1基因ORF的序列验证 | 第47页 |
| ·数据分析 | 第47-48页 |
| ·结果 | 第48-57页 |
| ·牙鲆dax1基因的序列与分析 | 第48-50页 |
| ·牙鲆Dax1蛋白的结构和性质推导 | 第50-51页 |
| ·牙鲆Dax1蛋白的同源性比较和分子系统发生 | 第51-57页 |
| ·讨论 | 第57-61页 |
| 第三章 牙鲆dax1启动子区分离及in silico分析 | 第61-75页 |
| ·材料与试剂 | 第61-62页 |
| ·实验材料 | 第61页 |
| ·主要仪器 | 第61页 |
| ·主要试剂 | 第61-62页 |
| ·质粒与菌株 | 第62页 |
| ·实验方法 | 第62-66页 |
| ·牙鲆dax1基因启动子区的克隆 | 第62-64页 |
| ·牙鲆dax1基因5'侧翼序列转录结合位点的预测 | 第64-65页 |
| ·牙鲆dax1基因CpG岛的预测 | 第65页 |
| ·牙鲆dax1 5’侧翼区的in silico分析 | 第65-66页 |
| ·结果 | 第66-72页 |
| ·牙鲆dax1基因的启动子区预测 | 第66-68页 |
| ·转录因子结合位点的预测 | 第68页 |
| ·dax1基因CpG岛预测 | 第68页 |
| ·牙鲆dax1 5’侧翼区的in silico分析 | 第68-72页 |
| ·讨论 | 第72-75页 |
| 第四章 牙鲆性别相关基因dax1的表达分析 | 第75-87页 |
| ·材料与试剂 | 第75-77页 |
| ·实验材料 | 第75-76页 |
| ·主要试剂 | 第76页 |
| ·主要仪器 | 第76页 |
| ·引物 | 第76-77页 |
| ·实验方法 | 第77-79页 |
| ·RT-PCR检测dax1在牙鲆成鱼不同组织的表达差异 | 第77-78页 |
| ·real-time RT-PCR | 第78-79页 |
| ·结果 | 第79-82页 |
| ·牙鲆dax1基因RT-PCR组织特异性表达 | 第79页 |
| ·dax1基因在牙鲆发育早期的表达 | 第79-80页 |
| ·dax1基因在牙鲆性腺分化过程中的表达 | 第80-82页 |
| ·dax1基因在牙鲆性腺发育各期的表达 | 第82页 |
| ·讨论 | 第82-87页 |
| 第五章 牙鲆性别相关基因dax1 CpG岛甲基化表观遗传修饰 | 第87-95页 |
| ·材料与试剂 | 第87-88页 |
| ·实验材料 | 第87页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第87-88页 |
| ·实验仪器 | 第88页 |
| ·菌株、载体 | 第88页 |
| ·引物 | 第88页 |
| ·实验方法 | 第88-91页 |
| ·性腺基因组DNA的提取 | 第88-89页 |
| ·PCR引物的设计与筛选 | 第89页 |
| ·基因组DNA的亚硫酸氢盐修饰 | 第89页 |
| ·亚硫酸氢盐修饰DNA的PCR | 第89-91页 |
| ·结果 | 第91-93页 |
| ·牙鲆性腺基因组DNA的提取 | 第91页 |
| ·PCR扩增结果及检测 | 第91-92页 |
| ·牙鲆两性性腺中dax1基因启动子CpG岛的甲基化水平 | 第92页 |
| ·雌核发育及雌核发育性反转牙鲆dax1基因CpG岛甲基化水平 | 第92-93页 |
| ·讨论 | 第93-95页 |
| 第六章 牙鲆dax1基因原核体外重组表达的初步研究 | 第95-105页 |
| ·实验材料 | 第95-97页 |
| ·实验样品 | 第95页 |
| ·主要试剂及溶液 | 第95-96页 |
| ·主要仪器 | 第96页 |
| ·质粒及菌株 | 第96页 |
| ·引物 | 第96-97页 |
| ·实验方法 | 第97-100页 |
| ·牙鲆dax1 ORF的PCR扩增 | 第97页 |
| ·表达质粒的构建 | 第97-98页 |
| ·表达质粒转化表达感受态 | 第98页 |
| ·重组蛋白的诱导表达 | 第98页 |
| ·重组蛋白可溶性分析 | 第98-99页 |
| ·诱导条件的优化 | 第99页 |
| ·Western Blot | 第99-100页 |
| ·结果 | 第100-104页 |
| ·牙鲆dax1重组表达质粒的构建 | 第100页 |
| ·牙鲆dax1重组蛋白在大肠杆菌中的表达 | 第100-101页 |
| ·重组蛋白可溶性分析 | 第101-102页 |
| ·诱导时间对Dax1重组蛋白表达量的影响 | 第102-103页 |
| ·IPTG诱导浓度对Dax1重组蛋白表达量的影响 | 第103-104页 |
| ·讨论 | 第104-105页 |
| 结论 | 第105-107页 |
| 附录 | 第107-113页 |
| 参考文献 | 第113-135页 |
| 致谢 | 第135-137页 |
| 学位论文评阅及答辩情况表 | 第137页 |
