| 中文摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 文献综述 | 第11-16页 |
| 1 草莓镶脉病毒 | 第11-12页 |
| ·草莓镶脉病毒的分布及危害 | 第11页 |
| ·草莓镶脉病毒的基因组结构 | 第11页 |
| ·草莓镶脉病毒编码的蛋白及功能 | 第11-12页 |
| 2 基因沉默 | 第12-16页 |
| ·基因沉默概述 | 第12-14页 |
| ·植物病毒编码 RNA 沉默抑制子 | 第14页 |
| ·CaMV 编码的 P6 蛋白是一个沉默抑制子 | 第14-15页 |
| ·沉默抑制子的鉴定方法 | 第15-16页 |
| ·稳定表达杂交法 | 第15页 |
| ·农杆菌共浸润法 | 第15页 |
| ·沉默逆转法 | 第15-16页 |
| 引言 | 第16-17页 |
| 材料与方法 | 第17-30页 |
| 1 供试材料 | 第17页 |
| ·病样来源 | 第17页 |
| ·植物材料 | 第17页 |
| ·菌种和载体 | 第17页 |
| ·酶和化学试剂 | 第17页 |
| ·常用缓冲溶液和培养基 | 第17页 |
| ·抗生素 | 第17页 |
| ·仪器设备 | 第17页 |
| 2 试验方法 | 第17-30页 |
| ·叶片总 DNA 的提取 | 第17-18页 |
| ·叶片总 RNA 的提取 | 第18-19页 |
| ·提RNA的准备工作 | 第18页 |
| ·Trizol抽提液提取总RNA方法 | 第18-19页 |
| ·cDNA的合成 | 第19页 |
| ·PCR技术 | 第19-20页 |
| ·PCR产物的克隆 | 第20-23页 |
| ·PCR产物回收和纯化 | 第20-21页 |
| ·PCR产物的连接 | 第21页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第21-22页 |
| ·EcoliDH5α感受态细胞的少量制备（CaCl_2法） | 第21页 |
| ·农杆菌感受态细胞的少量制备 | 第21-22页 |
| ·连接产物的转化 | 第22页 |
| ·连接产物转化大肠杆菌 | 第22页 |
| ·连接产物转化农杆菌（冻融法） | 第22页 |
| ·阳性克隆的PCR鉴定 | 第22页 |
| ·质粒提取 | 第22-23页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第23页 |
| ·植物表达载体的构建策略 | 第23-24页 |
| ·用于局部沉默和信号传导植物表达载体的构建策略 | 第23页 |
| ·用于沉默回复植物表达载体的构建策略 | 第23-24页 |
| ·植物表达载体的构建过程 | 第24-27页 |
| ·扩增P6基因及其突变体的引物设计与合成 | 第24-26页 |
| ·P6基因及其缺失突变体基因的克隆 | 第26页 |
| ·用于局部沉默和信号传导的植物表达载体的构建 | 第26页 |
| ·用于沉默回复的植物表达载体的构建 | 第26页 |
| ·重组植物表达载体导入农杆菌 | 第26-27页 |
| ·局部沉默试验中浸润16c本氏烟的方法 | 第27页 |
| ·沉默回复试验中浸润16c本氏烟的方法 | 第27-28页 |
| ·信号传导试验中浸润16c本氏烟的方法 | 第28页 |
| ·实时荧光定量PCR检测 | 第28-30页 |
| 结果与分析 | 第30-37页 |
| 1 P6基因植物表达载体的构建 | 第30-31页 |
| ·P6基因及其缺失突变体△P6阳性克隆的获得 | 第30页 |
| ·pCAM-CHP6和pCAM-CH△P6的构建 | 第30页 |
| ·pGR-CHP6和pGR-CH△P6植物表达载体的构建 | 第30-31页 |
| 2 16c本氏烟的荧光观察及分子检测 | 第31-37页 |
| ·P6蛋白能抑制16c本氏烟的局部沉默 | 第31-33页 |
| ·GFP诱导的16c本氏烟的沉默效率 | 第33-34页 |
| ·P6蛋白不能回复已建立的16c本氏烟的系统沉默 | 第34-35页 |
| ·P6蛋白能阻断或灭活GFP诱导的沉默信号的传导 | 第35-37页 |
| 讨论 | 第37-40页 |
| 1 SVBV编码的P6蛋白是RNA沉默抑制子 | 第37页 |
| 2 16c本氏烟系统沉默的效率及P6蛋白回复沉默的能力 | 第37页 |
| 3 P6蛋白可能以灭活的方式阻断沉默信号分子的传导 | 第37-38页 |
| 4 关于P6蛋白功能域研究的计划 | 第38-40页 |
| 全文小结 | 第40-41页 |
| 参考文献 | 第41-45页 |
| 附：草莓镶脉病毒ORFII基因的克隆、原核表达与抗血清制备 | 第45-55页 |
| 参考文献 | 第53-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 作者简介 | 第56页 |
| 发表文章 | 第56页 |
