水稻雌性育性控制蛋白PTB1的生化功能及相关差异表达蛋白研究
| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-9页 |
| 目录 | 第9-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-28页 |
| 1 植物雌性不育的研究进展 | 第12-15页 |
| ·植物雌性不育的分子生物学机制 | 第12-13页 |
| ·植物雌性不育基因的研究 | 第13页 |
| ·水稻雌性不育基因的类型与定位 | 第13-15页 |
| ·水稻雌性不育基因的类型 | 第14页 |
| ·水稻雌性不育基因的研究与定位 | 第14-15页 |
| ·植物雌性不育相关蛋白的研究 | 第15页 |
| 2 基因表达系统与重组蛋白质分离纯化的研究进展 | 第15-21页 |
| ·基因表达的规律 | 第16页 |
| ·基因的表达方式 | 第16页 |
| ·外源基因重组蛋白质表达系统 | 第16-19页 |
| ·原核表达系统 | 第17页 |
| ·真核表达系统 | 第17-18页 |
| ·无细胞蛋白表达系统 | 第18-19页 |
| ·重组蛋白质的分离纯化 | 第19-20页 |
| ·重组蛋白质的提取 | 第19-20页 |
| ·重组蛋白质的纯化 | 第20页 |
| ·蛋白的检测方法-WESTERN BLOT | 第20-21页 |
| ·Western Blot简介 | 第20页 |
| ·Western Blot的原理 | 第20-21页 |
| 3 泛素蛋白酶体途径的研究 | 第21-24页 |
| ·泛素调节的理论基础 | 第21页 |
| ·泛素蛋白酶体途径 | 第21-23页 |
| ·泛素-蛋白酶体途径的组成 | 第21-22页 |
| ·泛素-蛋白酶体途径介导的蛋白水解过程 | 第22-23页 |
| ·泛素E3连接酶家族蛋白的分类与功能研究进展 | 第23-24页 |
| ·泛素E3连接酶家族蛋白的分类 | 第23-24页 |
| ·泛素E3连接酶家族蛋白的功能研究进展 | 第24页 |
| 4 蛋白质组学研究进展 | 第24-26页 |
| ·蛋白质组学的概念 | 第24-25页 |
| ·蛋白质组学的研究内容和方法 | 第25页 |
| ·蛋白组分析的应用 | 第25-26页 |
| ·蛋白质组学研究的意义 | 第26页 |
| 5 本论文研究的背景、目的和意义 | 第26-28页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第28-48页 |
| 1 材料 | 第28-32页 |
| ·实验菌株和载体以及植物材料 | 第28页 |
| ·培养基 | 第28页 |
| ·重要试剂及溶液 | 第28-31页 |
| ·化学试剂和分子试剂 | 第28-29页 |
| ·常用抗生素及其工作浓度 | 第29页 |
| ·重要溶液 | 第29-31页 |
| ·重要仪器设备 | 第31-32页 |
| 2 试验方法 | 第32-48页 |
| ·相关表达的载体构建 | 第32-36页 |
| ·全长基因原核表达载体的构建 | 第32-34页 |
| ·无细胞表达体系载体的构建 | 第34页 |
| ·无跨膜结构的原核表达载体的构建 | 第34-36页 |
| ·目的蛋白的表达 | 第36-38页 |
| ·原核表达重组蛋白 | 第36-37页 |
| ·体外表达目的蛋白 | 第37-38页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第38-39页 |
| ·体外泛素化实验 | 第39-40页 |
| ·WESTERN BLOT | 第40-43页 |
| ·配置凝胶 | 第40-41页 |
| ·SDS-PAGE电泳 | 第41页 |
| ·转膜 | 第41-42页 |
| ·封闭 | 第42页 |
| ·孵育一抗 | 第42页 |
| ·孵育二抗 | 第42-43页 |
| ·ECL Plus检测液检测 | 第43页 |
| ·蛋白组分析 | 第43-48页 |
| ·水稻总蛋白的提取 | 第43-44页 |
| ·双向电泳 | 第44-46页 |
| ·质谱分析 | 第46-48页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第48-64页 |
| 1 PTB1蛋白结构的分析 | 第48-49页 |
| 2 PTB1基因表达载体的构建及表达 | 第49-55页 |
| ·全长基因表达载体的构建 | 第49-50页 |
| ·全长基因的表达 | 第50-53页 |
| ·全长基因的原核表达 | 第50-52页 |
| ·全长基因的体外表达 | 第52-53页 |
| ·无跨膜结构的原核表达载体的构建 | 第53-54页 |
| ·GST-RING的原核表达 | 第54-55页 |
| 3 重组蛋白的纯化 | 第55-57页 |
| 4 体外泛素化实验 | 第57-58页 |
| 5 PTB1相关差异表达蛋白鉴定 | 第58-64页 |
| ·双向电泳 | 第58-60页 |
| ·质谱分析结果 | 第60-64页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第64-68页 |
| 1 PTB1基因的表达 | 第64-65页 |
| 2 重组蛋白的纯化 | 第65页 |
| 3 PTB1蛋白的生化功能 | 第65-66页 |
| 4 蛋白质组学研究 | 第66-67页 |
| 5 后续工作展望 | 第67-68页 |
| ·继续尝试全长PTB1基因的表达 | 第67页 |
| ·寻找PTB1基因的底物 | 第67-68页 |
| 参考文献 | 第68-75页 |
| 附录 | 第75-78页 |
| 致谢 | 第78页 |
